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yicao917

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[交流] QPCR擴(kuò)增效率

我做miRNA頸環(huán)引物的QPCR，用頸環(huán)引物和隨機(jī)引物一起反轉(zhuǎn)，反轉(zhuǎn)后QPCR測(cè)miRNA和他調(diào)控的基因RNA水平，發(fā)現(xiàn)編碼基因的QRT擴(kuò)增效率接近2，而miRNA的擴(kuò)增效率全高于2，不知道是什么原因，我退火溫度是64℃，大家說(shuō)如果我退火溫度比較高的話有沒(méi)有可能在一個(gè)循環(huán)內(nèi)多次起始循環(huán)造成擴(kuò)增效率太高？

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1樓 2012-09-18 23:35:30

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userhung

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4樓2012-09-19 06:52:24

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gcworm

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16樓2012-09-19 11:35:06

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MIRNA直接加頸環(huán)P就OK了，隨機(jī)引物加入是作QP參照？

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17樓2012-09-19 16:35:46

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yicao917

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17樓: Originally posted by junminh at 2012-09-19 16:35:46
MIRNA直接加頸環(huán)P就OK了，隨機(jī)引物加入是作QP參照？

是為了順便檢測(cè)下靶基因

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18樓2012-09-19 18:54:04

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junminh

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是否有文獻(xiàn)或者驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)，對(duì)隨時(shí)引物的引入對(duì)實(shí)驗(yàn)是否有影響？

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20樓2012-09-20 10:09:03

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xw19880905

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22樓2012-09-20 16:00:14

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20樓: Originally posted by junminh at 2012-09-20 10:09:03
是否有文獻(xiàn)或者驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)，對(duì)隨時(shí)引物的引入對(duì)實(shí)驗(yàn)是否有影響？

沒(méi)有，我只是摸一下條件

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24樓2012-09-20 20:05:30

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fuqiang001

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25樓2012-09-21 00:45:33

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dongrh1981

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要看你Q-PCR用的是什么方法，如果是絕對(duì)定量的話，應(yīng)該就是這樣的結(jié)果，如果是相對(duì)定量的話要先確定兩套目的和內(nèi)參的擴(kuò)增效率一致，否則相對(duì)定量的值是不準(zhǔn)的。同理，從RNA到cDNA的過(guò)程也最好是隨機(jī)引物，有針對(duì)性的特異引物會(huì)放大目的與內(nèi)參的定量誤差。

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27樓2013-01-06 10:41:29

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