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求解：實(shí)時(shí)熒光定量PCR奇峰 已有8人參與
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求高人指點(diǎn)，最近在做定量PCR，陽(yáng)性擴(kuò)增曲線很好，可是陰性也有峰型。陰性Ct值在36以上，而且陽(yáng)性和陰性Ct值相差很大，這樣的結(jié)果怎么判定？ 重復(fù)了好幾次，陰性都是在36以后起峰，引物、模板都換了，依然是這個(gè)結(jié)果··· |
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西瓜
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小丹木木: 金幣+3, 斑斑很辛苦哈 2012-06-20 15:35:34
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小丹木木: 金幣+3, 斑斑很辛苦哈 2012-06-20 15:35:34
| 陰性的Ct值在35以上就可以認(rèn)為沒(méi)問(wèn)題了。微弱的非特異結(jié)合（錯(cuò)配、二聚體等）在多個(gè)循環(huán)之后可能有一些擴(kuò)增的，如果陰性對(duì)照在35個(gè)循環(huán)之后才出現(xiàn)的擴(kuò)增，一般認(rèn)為是正常的。樓主不放心的話，可以把陰性對(duì)照的產(chǎn)物拿去跑膠，沒(méi)有特異條帶的話就沒(méi)問(wèn)題了，當(dāng)然，可能有彌散的帶，那是非特異擴(kuò)增的產(chǎn)物。 |
10樓2012-06-20 15:31:32
l_h_10
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小丹木木: 金幣+2, 鼓勵(lì)交流 2012-06-20 15:34:56
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小丹木木: 金幣+2, 鼓勵(lì)交流 2012-06-20 15:34:56
| 你的陰性是沒(méi)加什么？如果是加了引物，沒(méi)加模版的話，有可能是引物污染了。（引物是在超凈工作臺(tái)里稀釋的嗎？）還有你用的是什么的試劑盒？如果是takara的試劑盒的話，也沒(méi)有關(guān)系了，他們?cè)噭┖械谋镜字当容^高，我們也出現(xiàn)過(guò)這個(gè)問(wèn)題，就咨詢過(guò)技術(shù)員，takara的技術(shù)員說(shuō)只要在35個(gè)循環(huán)之后出峰是沒(méi)有問(wèn)題的。 |
2樓2012-06-20 09:40:02
xiayongxiu
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3樓2012-06-20 11:24:29
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8樓2012-06-20 14:36:51
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9樓2012-06-20 15:09:24
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