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xuyan_1215新蟲(chóng) (小有名氣)
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[求助]
陽(yáng)性克隆的篩選問(wèn)題
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請(qǐng)教各位蟲(chóng)友，最近我在做連接，在轉(zhuǎn)化之后挑取平板上的單菌落進(jìn)行菌落pcr，結(jié)果顯示為陽(yáng)性的克隆卻在雙酶切的時(shí)候沒(méi)有目的片段，而且測(cè)序也沒(méi)有信號(hào)。請(qǐng)問(wèn)這是怎么回事呢？用什么方法檢驗(yàn)陽(yáng)性克隆比較科學(xué)呢？（注：菌落pcr時(shí)陰陽(yáng)性對(duì)照都設(shè)置了，陰性沒(méi)P出來(lái)，陽(yáng)性P出來(lái)的條帶比菌落亮） [ Last edited by xuyan_1215 on 2012-9-19 at 17:15 ] |
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工作量相當(dāng)大？ 一般轉(zhuǎn)化后要結(jié)合幾個(gè)方面確認(rèn)后再送出測(cè)序： 菌落PCR：可以使用目的片段引物，載體引物，以及2者搭配鑒定。 選陽(yáng)性克隆培養(yǎng)提質(zhì)粒，PCR再鑒定。 酶切鑒定。 以上都正確才會(huì)送出測(cè)序。這些過(guò)程都可以在1天內(nèi)完成，算不上工作量大吧。直接送出測(cè)序不僅浪費(fèi)時(shí)間，如果錯(cuò)了回來(lái)還得重來(lái)，得不償失。 |
6樓2012-09-20 10:20:31
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