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2002ymx銅蟲(chóng) (初入文壇)
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[求助]
實(shí)時(shí)定量PCR中提取RNA的問(wèn)題
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我現(xiàn)在正在做實(shí)時(shí)定量PCR,已將RNA提出,F(xiàn)有幾個(gè)問(wèn)題,希望幫助解答一下: 1.RNA提出后,我用DNA降解酶降解了一下,發(fā)現(xiàn)CDNA第一鏈合成試劑盒上說(shuō)明還進(jìn)行去除RNA的步驟,請(qǐng)問(wèn)一定要做嗎? 2.我想先用普通PCR先篩選一下引物,不用熒光PCR行嗎?(我得去別的實(shí)驗(yàn)室借用熒光PCR),苦呀! |
銅蟲(chóng) (小有名氣)

金蟲(chóng) (小有名氣)
| 第一個(gè)問(wèn)題,我覺(jué)得按著試劑盒說(shuō)的做應(yīng)該問(wèn)題不大,同意樓上的。至于第二個(gè)問(wèn)題,我的師姐們告訴我在做實(shí)時(shí)定量之前有必要再做一次普通的PCR,來(lái)確定合適的引物以及優(yōu)化PCR條件,這樣再去做定量的時(shí)候就不會(huì)重復(fù)。畢竟做定量的費(fèi)用要高于普通PCR的~ |
銅蟲(chóng) (初入文壇)
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謝謝各位,我已做完熒光PCR,上面的問(wèn)題已解決。 我的經(jīng)驗(yàn)是:1盡量找好一些的試劑,我用過(guò)兩種CDNA合成試劑盒,第一種特別浪費(fèi)RNA,P的效果也不理想,后找了東洋坊的試劑盒就很理想,有人告訴我天根更好,但是考慮錢(qián)的方面我還是用了東洋坊的,真希望自己是大牛,這樣花錢(qián)不愁,也能出好東西。 2.不恥下問(wèn),我們自己的實(shí)驗(yàn)室基本不做分子的實(shí)驗(yàn),弄的我只能上別的實(shí)驗(yàn)室問(wèn),慘的是別的實(shí)驗(yàn)室也是做大田的,而我做的是樹(shù)木,有時(shí)會(huì)到別的學(xué)校找人問(wèn),過(guò)程有點(diǎn)艱辛,但一切都是值得的。回顧以前的實(shí)驗(yàn)歷程,如果我肯早一點(diǎn)開(kāi)口問(wèn),可能實(shí)驗(yàn)會(huì)早半年完成。 |
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