 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 查看: 3123 | 回復(fù): 10 | ||
connieba新蟲 (小有名氣)
|
[求助]
全式金的pEASY-EI載體和目的基因連不上
|
| 做了很多次了，大小2.7kb的目的基因一直連不上pEASY-E1載體。感受態(tài)和載體確定都沒有問題，步驟也完全按照說明書上的做的。轉(zhuǎn)化Trans-T1感受態(tài)后涂Amp平板，能長出單菌落，但是挑取單菌落做菌落PCR都呈陰性。實(shí)在是找不到原因了，望好心人幫助~是實(shí)驗(yàn)手法的問題嗎？之前也做過連接1.8Kb目的基因的，很順利的就連上了~ |
回復(fù)此樓» 猜你喜歡
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之小鼠實(shí)驗(yàn)：嚴(yán)謹(jǐn)設(shè)計(jì)，解析生命機(jī)制的重要載體
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之重金屬檢測：精準(zhǔn)篩查，守護(hù)健康與環(huán)境的防線
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
化學(xué)工程及工業(yè)化學(xué)論文潤色/翻譯怎么收費(fèi)?
已經(jīng)有55人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之“蛙測重金屬我背鍋三千”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之“鼠逃三次我發(fā)三篇SCI”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
納米粒度分析
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
林科院林化所招收材料與化工專業(yè)碩士，坐標(biāo)南京
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
留學(xué)--博士招生
已經(jīng)有16人回復(fù)
-
化學(xué)工程，本211，求調(diào)劑，ab區(qū)不限
已經(jīng)有4人回復(fù)
-
邵陽學(xué)院食品與化學(xué)工程學(xué)院碩士調(diào)劑
已經(jīng)有0人回復(fù)
» 本主題相關(guān)價(jià)值貼推薦，對您同樣有幫助:
- 菌液PCR的結(jié)果顯示：陽性克隆較少，且目的條帶比較淺
已經(jīng)有12人回復(fù)
- 連接全式金的載體 pEASY-E1 Expression Kit, 表達(dá)不出目的蛋白，著急啊
已經(jīng)有5人回復(fù)
- 全式金的表達(dá)載體pEASY-E1/2怎么樣？有誰用過這個(gè)表達(dá)載體成功的嗎？
已經(jīng)有1人回復(fù)
- 全式金的表達(dá)載體pEASY-E2表達(dá)蛋白失敗
已經(jīng)有6人回復(fù)
- 求助 蛋白表達(dá)
已經(jīng)有2人回復(fù)
- 平末端連接不上，求助
已經(jīng)有21人回復(fù)
- 全式金的pEASY-E1表達(dá)載體
已經(jīng)有0人回復(fù)
atlanticwi
金蟲 (正式寫手)
琴美喜歡發(fā)呆 不喜歡發(fā)脾氣
- MolEPI: 25
- 應(yīng)助: 138 (高中生)
- 金幣: 141.2
- 散金: 350
- 紅花: 13
- 帖子: 536
- 在線: 313.2小時(shí)
- 蟲號: 1099992
- 注冊: 2010-09-15
- 專業(yè): 植物生理與生化
【答案】應(yīng)助回帖
★ ★ ★
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
小丹木木: 金幣+3, 鼓勵(lì)交流經(jīng)驗(yàn) 2012-09-21 14:26:39
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
小丹木木: 金幣+3, 鼓勵(lì)交流經(jīng)驗(yàn) 2012-09-21 14:26:39
|
嗯...................... 這個(gè)pEASY-E1是T載體嗎？是的話先確保A尾。2.7K有些大了，其他都沒有問題的話，試下延長連接時(shí)間，過夜較好，并確保2.7K的回收條帶純度高。 實(shí)在不行，就換載體，推薦Promega的pGEM-T，我3.6K多的基因一連一個(gè)準(zhǔn)。有時(shí)候選擇貴一點(diǎn)的東西是沒錯(cuò)的，不要貪圖便宜方便。 個(gè)人看法 若有說錯(cuò)請高手指點(diǎn)  |
2樓2012-09-21 13:52:28
connieba
新蟲 (小有名氣)
- 應(yīng)助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 842.5
- 帖子: 177
- 在線: 158.5小時(shí)
- 蟲號: 1460778
- 注冊: 2011-10-25
- 專業(yè): 微生物生理與生物化學(xué)
3樓2012-09-21 14:02:47
atlanticwi
金蟲 (正式寫手)
琴美喜歡發(fā)呆 不喜歡發(fā)脾氣
- MolEPI: 25
- 應(yīng)助: 138 (高中生)
- 金幣: 141.2
- 散金: 350
- 紅花: 13
- 帖子: 536
- 在線: 313.2小時(shí)
- 蟲號: 1099992
- 注冊: 2010-09-15
- 專業(yè): 植物生理與生化
4樓2012-09-21 15:27:34
connieba
新蟲 (小有名氣)
- 應(yīng)助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 842.5
- 帖子: 177
- 在線: 158.5小時(shí)
- 蟲號: 1460778
- 注冊: 2011-10-25
- 專業(yè): 微生物生理與生物化學(xué)
5樓2012-09-22 14:34:59
yananhl
銀蟲 (小有名氣)
- 應(yīng)助: 6 (幼兒園)
- 金幣: 499.1
- 散金: 167
- 帖子: 251
- 在線: 88.2小時(shí)
- 蟲號: 1892568
- 注冊: 2012-07-14
- 專業(yè): 分子與進(jìn)化生態(tài)學(xué)
6樓2012-10-25 16:44:07
connieba
新蟲 (小有名氣)
- 應(yīng)助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 842.5
- 帖子: 177
- 在線: 158.5小時(shí)
- 蟲號: 1460778
- 注冊: 2011-10-25
- 專業(yè): 微生物生理與生物化學(xué)
沒有哦，現(xiàn)在就直接放棄這個(gè)方法了……找不到問題出在哪里~希望你能解決問題啦…… 7樓2012-10-27 13:51:48
summergca
銅蟲 (初入文壇)
- 應(yīng)助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 119.8
- 帖子: 26
- 在線: 18.4小時(shí)
- 蟲號: 1888269
- 注冊: 2012-07-11
- 專業(yè): 微生物遺傳學(xué)
8樓2012-11-30 17:23:46
9樓2014-04-18 13:41:54
jmh5d
銅蟲 (初入文壇)
- 應(yīng)助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 110.9
- 帖子: 47
- 在線: 48.9小時(shí)
- 蟲號: 1860130
- 注冊: 2012-06-15
- 性別: GG
- 專業(yè): 植物化學(xué)保護(hù)
10樓2014-06-09 14:51:28
相關(guān)版塊跳轉(zhuǎn)
我要訂閱樓主 connieba 的主題更新
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 壓國家一區(qū)線，求導(dǎo)師收留，有恩必謝！ +7 | 迷人的哈哈 2026-03-28 | 7/350 |
|
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 本科雙非材料，跨考一志愿華電085801電氣，283求調(diào)劑，任何專業(yè)都可以 +5 | 芝士雪baoo 2026-03-28 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 0703化學(xué)求調(diào)劑 +9 | 奶油草莓. 2026-03-22 | 10/500 |
|
|
|
[考研] 一志愿南昌大學(xué)324求調(diào)劑 +7 | hanamiko 2026-03-27 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 考研調(diào)劑 +9 | 小蠟新筆 2026-03-26 | 9/450 |
|
|
|
[考研] 0703化學(xué)338求調(diào)劑！ +6 | Zuhui0306 2026-03-26 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 材料學(xué)碩333求調(diào)劑 +8 | 北道巷 2026-03-24 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 276求調(diào)劑。有半年電池和半年高分子實(shí)習(xí)經(jīng)歷 +10 | 材料學(xué)257求調(diào)劑 2026-03-23 | 11/550 |
|
|
|
[考研] 081200-11408-276學(xué)碩求調(diào)劑 +4 | 崔wj 2026-03-26 | 4/200 |
|
|
|
[考研]
 304材料求調(diào)劑
+4
|
鐘llll 2026-03-26 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 341求調(diào)劑 +7 | 青檸檬1 2026-03-26 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 化學(xué)工程085602 305分求調(diào)劑 +17 | RichLi_ 2026-03-25 | 17/850 |
|
|
|
[考研] 340求調(diào)劑 +3 | Amber00 2026-03-26 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 機(jī)械學(xué)碩310分，數(shù)一英一，一志愿211本科雙非找調(diào)劑信息 +3 | @357 2026-03-25 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 309求調(diào)劑 +4 | gajsj 2026-03-25 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 299求調(diào)劑 +4 | 15188958825 2026-03-25 | 4/200 |
|
|
|
[考研] B區(qū)考研調(diào)劑 +4 | yqdszhdap－ 2026-03-22 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 生物學(xué)學(xué)碩求調(diào)劑 +7 | 小羊睡著了? 2026-03-23 | 10/500 |
|
|
|
[考研] 材料專碩331求調(diào)劑 +4 | 鮮當(dāng)牛 2026-03-24 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 335求調(diào)劑 +4 | yuyu宇 2026-03-23 | 5/250 |
|