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一步一步木蟲 (著名寫手)
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[求助]
影響競爭Elisa結(jié)果的因素 已有1人參與
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最近在做小分子抗體的制備，確定產(chǎn)生的抗體是否是針對小分子的特異性的方法是用競爭Elisa檢測小分子是否具有明顯的競爭趨勢。之前已經(jīng)做了3個(gè)小分子化合物的抗體制備，其中有兩個(gè)化合物三免血清測定小分子的競爭趨勢不明顯，而第三個(gè)化合物的免疫血清競爭趨勢稍微好一些。當(dāng)然競爭趨勢的好壞最根本的原因是抗原制備的問題。在此先不談抗原制備方面的問題，想對于競爭Elisa中影響檢測結(jié)果的因素問一下大家，到底哪些因素會(huì)影響競爭Elisa的結(jié)果？？ 目前我關(guān)注的是小分子的溶劑問題。對于有些小分子不能溶于水，只能用DMSO等有機(jī)溶劑進(jìn)行溶解。在做競爭Elisa的時(shí)候，有時(shí)候可能在一定小分子濃度梯度范圍做不出競爭，所以要增大小分子的濃度范圍，而小分子的濃度越大，小分子中含有的有機(jī)試劑的比例就會(huì)越大（如將小分子濃度提至1mg/ml 或者0.5mg/ml），這就會(huì)導(dǎo)致在整個(gè)檢測體系中，各個(gè)檢測孔中的反應(yīng)體系是不同，最終可能會(huì)得到一個(gè)假陽性的結(jié)果，也就是在一個(gè)較大的小分子濃度梯度范圍內(nèi)是有競爭的。 對于Elisa這一塊，我是比較弱的，沒有任何經(jīng)驗(yàn)，所以想請教一下各位，是不是小分子的溶劑真的會(huì)對檢測結(jié)果有如此大的影響（尤其當(dāng)小分子的濃度梯度設(shè)的比較大的時(shí)候，像1mg/ml或者0.5mg/ml）？ 最后謝謝大家，希望在這方面有經(jīng)驗(yàn)的朋友多給點(diǎn)建議。  |
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