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zhuifeng7000至尊木蟲 (著名寫手)
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[求助]
求助：用BacterioMatch®II Two-Hybrid System對兩個蛋白進行細(xì)菌雙雜交 已有2人參與
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1、如題，不知有誰用過這個系統(tǒng)進行細(xì)菌雙雜交的實驗？ 2、XL1-Blue MRF´ Kan這個菌有三株，其實當(dāng)驗證兩個特定的蛋白是否有相互作用時，是否用其中的任意一株都可以的？ 3、如果兩個蛋白確實是有相互作用的，在板上應(yīng)該菌體應(yīng)該長成什么樣子？做到最后一步涂板后我的陽性對照、陰性對照還有目的菌長的都很小，菌體是否會長的比較大一點？是否會像DH5a或者Top10過夜在板上生長的樣子？ 謝謝！ |
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小丹木木: 金幣+3, 鼓勵積極交流經(jīng)驗 2012-11-02 13:35:12
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| 我之前也是做細(xì)菌雙雜交的，XL1-Blue MRF´ Kan這個菌只是用于前期載體構(gòu)建使用的，不可用于來兩種蛋白相互作用的篩選，進行該步驟使用的是reporter competent cell。如果兩種蛋白相互作用的話，在3-AT平板上可以長出一些單菌落，使用引物pBT F/R and pTRG F/R擴增時，是可以擴增出相應(yīng)條帶的。培養(yǎng)時間是需要很長（40h），不過結(jié)果還是可行的。不過它的菌落形態(tài)與DH5a不同。 |
2樓2012-11-01 11:35:14
zhuifeng7000
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5樓2013-06-05 19:33:11
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8樓2013-09-30 08:47:15
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zhuifeng7000: 金幣+5, ★★★很有幫助 2013-12-30 08:57:44
zhuifeng7000: 金幣+5, ★★★很有幫助 2013-12-30 08:57:44
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以下是兩種菌的遺傳背景，我認(rèn)為還是不同的。我有嘗試用兩種菌同時實驗，用XL1-Blue MRF‘ Kan菌株進行轉(zhuǎn)化，連陰性control都可以長。 Validation Reporter Cells ： Δ(mcrA)183 Δ(mcrCB-hsdSMR-mrr)173 endA1 hisB supE44 thi-1 recA1 gyrA96 relA1 lac [F′ laqIq HIS3 aadA Kanr] XL1-Blue MRF′ Kan ： Δ(mcrA)183 Δ(mcrCB-hsdSMR-mrr)173 endA1 supE44 thi-1 recA1 gyrA96 relA1 lac [F′ proAB lacIqZΔM15 Tn5 (Kanr)]. |
9樓2013-12-27 17:01:09
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10樓2013-12-30 08:57:34
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