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zhuifeng7000至尊木蟲 (著名寫手)
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[求助]
求助：用BacterioMatch®II Two-Hybrid System對兩個(gè)蛋白進(jìn)行細(xì)菌雙雜交 已有2人參與
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1、如題，不知有誰用過這個(gè)系統(tǒng)進(jìn)行細(xì)菌雙雜交的實(shí)驗(yàn)？ 2、XL1-Blue MRF´ Kan這個(gè)菌有三株，其實(shí)當(dāng)驗(yàn)證兩個(gè)特定的蛋白是否有相互作用時(shí)，是否用其中的任意一株都可以的？ 3、如果兩個(gè)蛋白確實(shí)是有相互作用的，在板上應(yīng)該菌體應(yīng)該長成什么樣子？做到最后一步涂板后我的陽性對照、陰性對照還有目的菌長的都很小，菌體是否會長的比較大一點(diǎn)？是否會像DH5a或者Top10過夜在板上生長的樣子？ 謝謝！ |
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zhuifeng7000
至尊木蟲 (著名寫手)
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3樓2012-11-01 23:08:59
11ychen
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zhuifeng7000: 金幣+5, ★有幫助, 感謝交流~ 2012-11-01 23:09:23
小丹木木: 金幣+3, 鼓勵(lì)積極交流經(jīng)驗(yàn) 2012-11-02 13:35:12
zhuifeng7000: 金幣+5, ★有幫助, 感謝交流~ 2012-11-01 23:09:23
小丹木木: 金幣+3, 鼓勵(lì)積極交流經(jīng)驗(yàn) 2012-11-02 13:35:12
| 我之前也是做細(xì)菌雙雜交的，XL1-Blue MRF´ Kan這個(gè)菌只是用于前期載體構(gòu)建使用的，不可用于來兩種蛋白相互作用的篩選，進(jìn)行該步驟使用的是reporter competent cell。如果兩種蛋白相互作用的話，在3-AT平板上可以長出一些單菌落，使用引物pBT F/R and pTRG F/R擴(kuò)增時(shí)，是可以擴(kuò)增出相應(yīng)條帶的。培養(yǎng)時(shí)間是需要很長（40h），不過結(jié)果還是可行的。不過它的菌落形態(tài)與DH5a不同。 |
2樓2012-11-01 11:35:14
11ychen
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4樓2012-11-03 19:45:14
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【答案】應(yīng)助回帖
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myprayer: 金幣+1, 贈人玫瑰，手有余香。分子生物期待更詳細(xì)的解答 2013-09-30 09:03:16
myprayer: 金幣+1, 贈人玫瑰，手有余香。分子生物期待更詳細(xì)的解答 2013-09-30 09:03:16
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XL1-Blue MRF這個(gè)菌的基因型和reporter competent cell是不一樣的。 有個(gè)問題想請教一下： 我現(xiàn)在用這個(gè)系統(tǒng)做互作，陽性和陰性control都很好，但是檢測相互作用都是陰性結(jié)果。而且驗(yàn)證文獻(xiàn)報(bào)道的互作也是陰性結(jié)果。這個(gè)很令人費(fèi)解�？梢哉{(diào)整的條件試過很多。。。 |
5樓2013-06-05 19:33:11
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