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遠(yuǎn)哥不傻b木蟲 (正式寫手)
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[求助]
關(guān)于液相條件的問(wèn)題
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想向各位大俠請(qǐng)教個(gè)問(wèn)題:在液相檢測(cè)過(guò)程中，檢測(cè)條件是如何確定的？什么時(shí)候用梯度，什么時(shí)候用等度？ PS:我在進(jìn)液相的時(shí)候總是用文獻(xiàn)中的已知條件或者是師兄師姐告訴的方法做，但是對(duì)于梯度和等度之間有什么區(qū)別理解不上去啊，假如我遇到一個(gè)未知的物質(zhì)，我該怎樣選條件進(jìn)行檢測(cè)呢？ 理論基礎(chǔ)太次，希望大家多多指教！最好說(shuō)的詳細(xì)一些， 呵。。呵。。 多謝各位大俠啦·~ |
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容月~
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分析條件，能用等度盡量用等度，梯度洗脫平衡時(shí)間長(zhǎng)，重現(xiàn)性差，如果是做方法學(xué)，將帶來(lái)一定的麻煩。 等度條件下雜質(zhì)與主成分分離度達(dá)不到要求時(shí)，可以進(jìn)行有機(jī)相比例、ph值、鹽濃度篩選，這些條件都不行的情況下再用梯度。 梯度條件可以將雜質(zhì)與主成分很好的分離，但是由于其比例在不停的變化，所以平衡存在問(wèn)題，重現(xiàn)也是一個(gè)問(wèn)題，因此就對(duì)試劑色譜柱要求很高。當(dāng)流動(dòng)相中存在離子對(duì)試劑時(shí)，用梯度洗脫更是一個(gè)問(wèn)題 |
2樓2012-10-08 13:29:32
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3樓2012-10-08 15:03:53
bcschina
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毫無(wú)疑問(wèn) 對(duì)于未知樣品 當(dāng)然首推梯度 其實(shí)這個(gè)問(wèn)題不難理解 氣相和液相 彼此相通之處 就是可以把液相的梯度洗脫 理解為氣相的程序升溫 一個(gè)是通過(guò)溫度的變化 使被分離物質(zhì)逐個(gè)脫離氣相柱的固定液 而液相則是通過(guò)流動(dòng)相極性的變化 逐個(gè)使被分離物質(zhì) 一一洗脫 所以 如果樣品成分比較單一 各個(gè)組分極性或者官能團(tuán)比較類似 很明顯出峰肯定會(huì)比較靠近 這時(shí)肯定用等度的洗脫 才能獲得比較好的分離效果 用梯度的話 由于極性變化大 很容易一起擠在一起出峰 無(wú)法獲得好的分離效果 反之 如果樣品成分復(fù)雜 必須要用不同的大范圍的極性變化的流動(dòng)相 才能一一洗脫 那就只能用梯度了 當(dāng)然 也可以在有類似成分的時(shí)候 讓等度的流動(dòng)相多走一會(huì)兒 待成分洗脫后 再繼續(xù)梯度洗脫 梯度洗脫對(duì)保護(hù)柱子 只要不是太多水相的 實(shí)際上就是在沖洗柱子 對(duì)柱子有益的 但我對(duì)二樓的觀點(diǎn)有點(diǎn)不能茍同 梯度洗脫的重現(xiàn)性差 我覺(jué)得如果儀器性能OK的話 梯度洗脫由于極性的變化幅度大 洗脫能力強(qiáng) 實(shí)際上更能穩(wěn)定保留時(shí)間 這是很容易理解的 如同氣相的程序升溫是一個(gè)道理 我剛接觸液相時(shí) 大多是等度的 但后來(lái)做了很多新方法 發(fā)現(xiàn)國(guó)外老外們 通常更喜歡梯度 呵呵 |
4樓2012-10-08 17:52:49
lankywang
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5樓2012-10-08 21:33:34
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| 對(duì)于未知的我們剛開始不知道出峰情況的，我們是要先用梯度，根據(jù)出峰情況算出有機(jī)相比例。知道比例后，我覺(jué)得還是要先用等度，能分開就不用梯度。首先等度重現(xiàn)性好，操作簡(jiǎn)便。做質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究的時(shí)候很容易。梯度是好，可以使分離度、理論塔板數(shù)、拖尾因子、出峰時(shí)間等都可以達(dá)到要走求。但是我們做了那么多方法學(xué)之后發(fā)現(xiàn)，梯度對(duì)試劑、儀器、環(huán)境等條件要求很高，還要先從成本考慮。稍微有點(diǎn)不達(dá)條件都會(huì)使實(shí)驗(yàn)結(jié)果有差異。因此在時(shí)間多，安排不緊的情況下，我們都會(huì)先從等度開始再到梯度。 |
6樓2012-10-09 10:17:47
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