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遠哥不傻b木蟲 (正式寫手)
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[求助]
關(guān)于液相條件的問題
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想向各位大俠請教個問題:在液相檢測過程中，檢測條件是如何確定的？什么時候用梯度，什么時候用等度？ PS:我在進液相的時候總是用文獻中的已知條件或者是師兄師姐告訴的方法做，但是對于梯度和等度之間有什么區(qū)別理解不上去啊，假如我遇到一個未知的物質(zhì)，我該怎樣選條件進行檢測呢？ 理論基礎(chǔ)太次，希望大家多多指教！最好說的詳細一些， 呵。。呵。。 多謝各位大俠啦·~ |
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3樓2012-10-08 15:03:53
容月~
金蟲 (著名寫手)
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分析條件，能用等度盡量用等度，梯度洗脫平衡時間長，重現(xiàn)性差，如果是做方法學(xué)，將帶來一定的麻煩。 等度條件下雜質(zhì)與主成分分離度達不到要求時，可以進行有機相比例、ph值、鹽濃度篩選，這些條件都不行的情況下再用梯度。 梯度條件可以將雜質(zhì)與主成分很好的分離，但是由于其比例在不停的變化，所以平衡存在問題，重現(xiàn)也是一個問題，因此就對試劑色譜柱要求很高。當流動相中存在離子對試劑時，用梯度洗脫更是一個問題 |
2樓2012-10-08 13:29:32
bcschina
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毫無疑問 對于未知樣品 當然首推梯度 其實這個問題不難理解 氣相和液相 彼此相通之處 就是可以把液相的梯度洗脫 理解為氣相的程序升溫 一個是通過溫度的變化 使被分離物質(zhì)逐個脫離氣相柱的固定液 而液相則是通過流動相極性的變化 逐個使被分離物質(zhì) 一一洗脫 所以 如果樣品成分比較單一 各個組分極性或者官能團比較類似 很明顯出峰肯定會比較靠近 這時肯定用等度的洗脫 才能獲得比較好的分離效果 用梯度的話 由于極性變化大 很容易一起擠在一起出峰 無法獲得好的分離效果 反之 如果樣品成分復(fù)雜 必須要用不同的大范圍的極性變化的流動相 才能一一洗脫 那就只能用梯度了 當然 也可以在有類似成分的時候 讓等度的流動相多走一會兒 待成分洗脫后 再繼續(xù)梯度洗脫 梯度洗脫對保護柱子 只要不是太多水相的 實際上就是在沖洗柱子 對柱子有益的 但我對二樓的觀點有點不能茍同 梯度洗脫的重現(xiàn)性差 我覺得如果儀器性能OK的話 梯度洗脫由于極性的變化幅度大 洗脫能力強 實際上更能穩(wěn)定保留時間 這是很容易理解的 如同氣相的程序升溫是一個道理 我剛接觸液相時 大多是等度的 但后來做了很多新方法 發(fā)現(xiàn)國外老外們 通常更喜歡梯度 呵呵 |
4樓2012-10-08 17:52:49
lankywang
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5樓2012-10-08 21:33:34
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