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weining1203新蟲(chóng) (小有名氣)
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[求助]
關(guān)于pET-32a表達(dá)的一些問(wèn)題
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我的目的蛋白大概78Kd，使用pET-32a表達(dá)載體，酶切位點(diǎn)為sacI和Xhol， 上游引物 5G GAGCTC（SacI）ATGGTTGCAGCAGCAGAAAT3 下游引物 5CCG CTCGAG（Xhol）TCAGAATGGGCCAGGAGTTC3 設(shè)計(jì)的引物上游有起始密碼子，下游有終止密碼子，那么最終表達(dá)的蛋白到底有多大呢？求大神指點(diǎn) |
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Marado
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【答案】應(yīng)助回帖
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
| ……你都說(shuō)你目的蛋白78kd了，那你表達(dá)出來(lái)的應(yīng)該就是78kd+HIS標(biāo)簽的大小. |
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weining1203
2樓2012-10-09 15:13:15
weining1203
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3樓2012-10-09 15:42:44
Marado
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【答案】應(yīng)助回帖
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加幾個(gè)HIS取決于你用的載體.以6個(gè)His為例子，分子量是155*6=1KD |
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4樓2012-10-09 15:56:54
weining1203
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5樓2012-10-11 14:51:18
ypan
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【答案】應(yīng)助回帖
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做SDS-PAGE大概的顯示條帶為90～100KDa. 在你的目的蛋白前面還有約170個(gè)氨基酸，包括Trx.TAG, S.TAG, His.TAG等蛋白序列。 核對(duì)pET-32a質(zhì)粒圖譜算出來(lái)。 |
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6樓2012-10-11 16:12:56
hippo_li
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【答案】應(yīng)助回帖
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小丹木木: 金幣+2, 鼓勵(lì)交流 2012-10-12 15:46:09
| 樓上說(shuō)得對(duì)，pET32載體上還有Trx.tag, S.tag, His.tag序列，根據(jù)pET系統(tǒng)的說(shuō)明書(shū)，插入大小約為20.4 kDa，加上原來(lái)的78 kDa，大約100 kDa。 |
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7樓2012-10-11 18:27:02
weining1203
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8樓2012-10-11 19:41:05
weining1203
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9樓2012-10-11 19:41:14
10樓2012-10-12 12:35:02
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