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weining1203新蟲 (小有名氣)
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[求助]
關(guān)于pET-32a表達的一些問題
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我的目的蛋白大概78Kd，使用pET-32a表達載體，酶切位點為sacI和Xhol， 上游引物 5G GAGCTC（SacI）ATGGTTGCAGCAGCAGAAAT3 下游引物 5CCG CTCGAG（Xhol）TCAGAATGGGCCAGGAGTTC3 設(shè)計的引物上游有起始密碼子，下游有終止密碼子，那么最終表達的蛋白到底有多大呢？求大神指點 |
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Marado
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| ……你都說你目的蛋白78kd了，那你表達出來的應(yīng)該就是78kd+HIS標(biāo)簽的大小. |
weining1203
2樓2012-10-09 15:13:15
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3樓2012-10-09 15:42:44
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4樓2012-10-09 15:56:54
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5樓2012-10-11 14:51:18
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weining1203: 金幣+8, ★有幫助 2012-10-12 20:12:09
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做SDS-PAGE大概的顯示條帶為90～100KDa. 在你的目的蛋白前面還有約170個氨基酸，包括Trx.TAG, S.TAG, His.TAG等蛋白序列。 核對pET-32a質(zhì)粒圖譜算出來。 |
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6樓2012-10-11 16:12:56
hippo_li
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| 樓上說得對，pET32載體上還有Trx.tag, S.tag, His.tag序列，根據(jù)pET系統(tǒng)的說明書，插入大小約為20.4 kDa，加上原來的78 kDa，大約100 kDa。 |
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7樓2012-10-11 18:27:02
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9樓2012-10-11 19:41:14
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