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北京石油化工學(xué)院2026年研究生招生接收調(diào)劑公告

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ding_winnie

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[交流] PCR實(shí)驗(yàn)疑問

各位在做PCR的時(shí)候有沒有出現(xiàn)過這樣的情況，25ul體系可以得到很好的目的條帶，但是同樣的條件，50ul就不能得到目的條帶。而且這樣的情況并不是每次都會(huì)出現(xiàn)，只針對(duì)某些基因片段。

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1樓 2012-10-09 18:57:14

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asdkingstar

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ding_winnie(金幣+1): 謝謝參與
小丹木木: 金幣+1, 鼓勵(lì)交流 2012-10-10 19:15:16

分子實(shí)驗(yàn)就是這樣，第一次做可能有，但是第二次就沒有，第三次還是沒有，可是第4次又有了，它對(duì)條件要求很高，所以就會(huì)出現(xiàn)樓主這樣的情況。隨便更改個(gè)條件就會(huì)出現(xiàn)很多問題。

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2樓2012-10-09 20:32:02

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piaoyunokok

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ding_winnie(金幣+1): 謝謝參與

確實(shí)好多分子實(shí)驗(yàn)都說不清楚的。樓主的反應(yīng)體系就是對(duì)應(yīng)加大的嗎？也有可能是操作的問題,我也經(jīng)常碰到類似情況。。。

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3樓2012-10-09 21:05:41

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飛飛0123

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我今天就出現(xiàn)同樣問題了，第一次負(fù)對(duì)照出現(xiàn)條帶了，第二次做又所有的沒有條帶了，真不知道哪出問題了唉

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4樓2012-10-09 21:13:18

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joan198108

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總體來(lái)說PCR是個(gè)簡(jiǎn)單的實(shí)驗(yàn)，但是卻又很復(fù)雜，好多結(jié)果都不容易分析，難以找出原因，只能靠經(jīng)驗(yàn)和推測(cè)，然后逆向驗(yàn)證

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5樓2012-10-10 08:15:22

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cicelyzh

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這個(gè)我也遇到過，說不清原因。最后干脆就做25ul的了。如果PCR的效率不錯(cuò)的話回收克隆也夠用了。

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6樓2012-10-10 08:52:02

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分子菜鳥

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弄兩個(gè)25不就是50了嗎……

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7樓2012-10-10 09:03:31

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s20121113

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路過，來(lái)學(xué)習(xí)一下！

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8樓2012-10-11 08:43:34

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靜安jingan

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哎，這個(gè)是個(gè)很郁悶的事情，明明前一次做得時(shí)候有么，下一次就沒有了

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9樓2012-10-11 22:35:57

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佩琪

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我在做實(shí)驗(yàn)的過程中也發(fā)現(xiàn)，一般小體積比大體積的PCR效果要好，而且不同的PCR儀P出的效果也不一樣~

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10樓2012-10-12 16:22:50

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是的哇如果50的P不出來(lái)就用25的

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11樓2012-10-13 22:47:03

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2樓: Originally posted by asdkingstar at 2012-10-09 20:32:02
分子實(shí)驗(yàn)就是這樣，第一次做可能有，但是第二次就沒有，第三次還是沒有，可是第4次又有了，它對(duì)條件要求很高，所以就會(huì)出現(xiàn)樓主這樣的情況。隨便更改個(gè)條件就會(huì)出現(xiàn)很多問題。

是的呢~經(jīng)常反復(fù)，但是總結(jié)額幾次的經(jīng)驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)P不出來(lái)還是有原因的，所以做實(shí)驗(yàn)就是要總結(jié)各種經(jīng)驗(yàn)~祝各位實(shí)驗(yàn)順利！

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12樓2012-12-28 10:55:39

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清風(fēng)寨

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小木蟲: 金幣+0.5, 給個(gè)紅包，謝謝回帖

我也遇到了做了N次才發(fā)現(xiàn)25的能出來(lái) 郁悶死了以后就只能做25的體系

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13樓2012-12-28 13:24:15

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13樓: Originally posted by 清風(fēng)寨 at 2012-12-28 13:24:15
我也遇到了做了N次才發(fā)現(xiàn)25的能出來(lái) 郁悶死了以后就只能做25的體系

有可能是50ul體系大，傳熱不好，沒太弄明白是怎么回事，反正25可以P出來(lái)就好了~祝實(shí)驗(yàn)順利！~

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14樓2012-12-28 14:21:49

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