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wei_suzhen新蟲(chóng) (小有名氣)
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[求助]
怎樣確定合適的Tm值？
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下面是我的引物的一些數(shù)據(jù)，根據(jù)這些數(shù)據(jù)怎么設(shè)計(jì)合適的退火溫度？如果利用溫度梯度來(lái)尋找合適的退火溫度，大約從哪個(gè)范圍設(shè)計(jì)溫度，梯度是多少？每個(gè)梯度需要設(shè)計(jì)幾個(gè)重復(fù)樣品? 引物設(shè)計(jì).png |
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cicelyzh
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wei_suzhen
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7樓2012-10-14 19:36:17
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【答案】應(yīng)助回帖
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感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
小丹木木: 金幣+2, 鼓勵(lì)應(yīng)助 2012-10-15 13:49:20
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| 給你建議條件允許的話(huà)，你可以對(duì)合成幾對(duì)�？茨闵厦娴腜RIMER軟件引物合成條件來(lái)看，不夠嚴(yán)謹(jǐn)，TM值上下部超過(guò)5，GC含量同樣，下面的發(fā)卡結(jié)構(gòu)，引物二聚體等指標(biāo)全部為NO.一般用PCR在模版P時(shí)，退貨溫度按引物合成單上為參考，做梯度，一般6個(gè)梯度，做個(gè)陰性陽(yáng)性對(duì)照，六個(gè)梯度一般2°，結(jié)果應(yīng)該可以的，通過(guò)跑膠你會(huì)摸到合適的退貨溫度的。祝成功。 |
10樓2012-10-15 11:14:47
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