 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 8 | 1/1 | 返回列表 |
| 查看: 1242 | 回復(fù): 7 | ||
shenxing325銅蟲 (小有名氣)
|
[求助]
請問RT-PCR的過程會產(chǎn)生插入、缺失、突變等情況嗎？
|
|
跟各位請教一下： 第一次提RNA做RT-PCR，反轉(zhuǎn)錄用的酶是promega的M-MLV，PCR用的酶是Takara的高保真酶PrimeSTAR，然后用rTag酶72度處理了30min加A尾，最后轉(zhuǎn)進T載體里面。如圖所示，是T載體轉(zhuǎn)化后的菌落PCR圖，感覺幾個條帶的位置都稍有差異，所以選取了3、4、5三個較濃、大小有代表性的菌落搖菌然后測序。過程大致就是這樣。 結(jié)果讓我奇怪的是這三個里面只有一個是我要的目的基因（5號），另外兩個，其中一個（3號）發(fā)生了一些插入和缺失，有一大段和模板比對本來應(yīng)該是在偏上游的位置，結(jié)果整段缺失，在偏下游的位置卻出現(xiàn)了，并且多出了一個堿基，導致后面的序列都移碼了；另外一個（4號）更加奇怪，幾乎沒有完整的orf除了上游引物部分對得上，后面的就完全不是我要的東西了，在NCBI上blast了一下，只有一個序列約有60%不到的堿基能比對得上，是屬于比較近源的物種里面的。 我想弄明白的是，這兩段奇怪序列是從哪里來的，是在反轉(zhuǎn)錄的時候發(fā)生的插入、缺失和突變嗎？為何還能得到我本來想要的序列？有勞各位！ @Y7KQ[%20`D[Q$(49ILNSUW_副本.jpg |
回復(fù)此樓» 猜你喜歡
不合理蛙科研實驗之小鼠實驗：嚴謹設(shè)計，解析生命機制的重要載體
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實驗之重金屬檢測：精準篩查，守護健康與環(huán)境的防線
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
化學工程及工業(yè)化學論文潤色/翻譯怎么收費?
已經(jīng)有272人回復(fù)
-
不合理蛙科研實驗之“蛙測重金屬我背鍋三千”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實驗之“鼠逃三次我發(fā)三篇SCI”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
納米粒度分析
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
林科院林化所招收材料與化工專業(yè)碩士，坐標南京
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
留學--博士招生
已經(jīng)有16人回復(fù)
-
化學工程，本211，求調(diào)劑，ab區(qū)不限
已經(jīng)有4人回復(fù)
-
邵陽學院食品與化學工程學院碩士調(diào)劑
已經(jīng)有0人回復(fù)
» 本主題相關(guān)價值貼推薦，對您同樣有幫助:
- 【求助/交流】RT-PCR ，內(nèi)參在哪個步驟添加以及marker何時使用及確定？謝謝
已經(jīng)有14人回復(fù)
shenxing325
銅蟲 (小有名氣)
- 應(yīng)助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 102.5
- 紅花: 2
- 帖子: 73
- 在線: 26.8小時
- 蟲號: 1334715
- 注冊: 2011-06-30
- 專業(yè): 生物大分子結(jié)構(gòu)與功能
2樓2012-10-15 15:08:31
晨鐘暮鼓w
金蟲 (小有名氣)
- 應(yīng)助: 1 (幼兒園)
- 金幣: 1135.6
- 紅花: 3
- 帖子: 200
- 在線: 118.1小時
- 蟲號: 2009472
- 注冊: 2012-09-18
- 性別: GG
- 專業(yè): 免疫遺傳學
3樓2012-10-15 15:56:03
shenxing325
銅蟲 (小有名氣)
- 應(yīng)助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 102.5
- 紅花: 2
- 帖子: 73
- 在線: 26.8小時
- 蟲號: 1334715
- 注冊: 2011-06-30
- 專業(yè): 生物大分子結(jié)構(gòu)與功能
4樓2012-10-15 16:28:21
shenxing325
銅蟲 (小有名氣)
- 應(yīng)助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 102.5
- 紅花: 2
- 帖子: 73
- 在線: 26.8小時
- 蟲號: 1334715
- 注冊: 2011-06-30
- 專業(yè): 生物大分子結(jié)構(gòu)與功能
5樓2012-10-15 21:35:02
shenxing325
銅蟲 (小有名氣)
- 應(yīng)助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 102.5
- 紅花: 2
- 帖子: 73
- 在線: 26.8小時
- 蟲號: 1334715
- 注冊: 2011-06-30
- 專業(yè): 生物大分子結(jié)構(gòu)與功能
6樓2012-10-18 10:05:30
晨鐘暮鼓w
金蟲 (小有名氣)
- 應(yīng)助: 1 (幼兒園)
- 金幣: 1135.6
- 紅花: 3
- 帖子: 200
- 在線: 118.1小時
- 蟲號: 2009472
- 注冊: 2012-09-18
- 性別: GG
- 專業(yè): 免疫遺傳學
shenxing3257樓2012-10-18 10:10:21
shenxing325
銅蟲 (小有名氣)
- 應(yīng)助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 102.5
- 紅花: 2
- 帖子: 73
- 在線: 26.8小時
- 蟲號: 1334715
- 注冊: 2011-06-30
- 專業(yè): 生物大分子結(jié)構(gòu)與功能
8樓2012-10-19 20:03:46
相關(guān)版塊跳轉(zhuǎn)
我要訂閱樓主 shenxing325 的主題更新
| 8 | 1/1 | 返回列表 |
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 085600，專業(yè)課化工原理，320分求調(diào)劑 +4 | 大饞小子 2026-03-29 | 4/200 |
|
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 材料與化工272求調(diào)劑 +16 | 阿斯蒂芬2004 2026-03-28 | 16/800 |
|
|
|
[考研] 總分293求調(diào)劑 +8 | 加一一九 2026-03-25 | 11/550 |
|
|
|
[考研] 一志愿北京理工大學本科211材料工程294求調(diào)劑 +8 | mikasa的圍巾 2026-03-28 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 調(diào)劑求院校招收 +6 | 鶴鯨鴿 2026-03-28 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 學碩274求調(diào)劑 +9 | Li李魚 2026-03-26 | 9/450 |
|
|
|
[考研] 一志愿南京航空航天大學材料學碩求調(diào)劑 +3 | @taotao 2026-03-28 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 材料求調(diào)劑 一志愿哈工大總分298分，前三科223分 +5 | dongfang59 2026-03-27 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 一志愿上海理工能源動力（085800）310分求調(diào)劑 +3 | zhangmingc 2026-03-27 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 272求調(diào)劑 +7 | 腳滑的守法公民 2026-03-27 | 7/350 |
|
|
|
[考博] 26申博 +3 | 加油沖�。� 2026-03-26 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 305求調(diào)劑 +5 | 哇盧卡庫 2026-03-26 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 材料調(diào)劑 +8 | 匹克i 2026-03-23 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 324求調(diào)劑 +8 | hanamiko 2026-03-26 | 10/500 |
|
|
|
[考研] 343求調(diào)劑 +4 | 贈我一本書 2026-03-23 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 303求調(diào)劑 +6 | 藍山月 2026-03-25 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 296求調(diào)劑 +4 | 汪！？！ 2026-03-25 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 材料調(diào)劑 +3 | iwinso 2026-03-23 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 086003食品工程求調(diào)劑 +6 | 淼淼111 2026-03-24 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 269求調(diào)劑 +4 | 我想讀研11 2026-03-23 | 4/200 |
|