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wandahuan銅蟲 (小有名氣)
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請大家?guī)臀铱纯次业膕outhern blot 圖片，不知道問題出在哪里了，謝謝 已有1人參與
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southern blot 實(shí)驗(yàn)?zāi)康氖菫榱蓑?yàn)證突變體基因被敲除（1,2分別是兩個(gè)不同突變體） 1.使用單酶切5小時(shí)左右； 2.基因組DNA濃度約為450ng/uL，上樣量每孔50微升，跑膠（0.8%）5小時(shí)左右，條帶很亮； 3.試劑盒是Roche Kit I, 洗脫條件為：68℃ 2×SSC，0.1%SDS 洗30min, 68℃ 0.5×SSC，0.1%SDS 洗15min，洗兩次； 4.探針是PCR目的基因部分片段的回收產(chǎn)物，大小約為400和700bp。 問題： 探針第一和第二次用的相同，第一次Marker（TAKARA DL15000）未雜出條帶，目的基因野生型與突變體有目的條帶； 第二次-1基因做出來了，-2效果不太好； 第三次-1是新做的探針，有雜帶，背景信號也很高，-2仍是之前的探針，卻沒有雜出目標(biāo)條帶。 麻煩大家?guī)臀曳治龇治鍪鞘裁丛�，有什么好的解決方法。不甚感激~~~~ 第一次-1.jpg 第一次-2.jpg 第二次-1.jpg 第二次-2.jpg 第三次-1.jpg 第三次-2.jpg |
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lily981107
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【答案】應(yīng)助回帖
★ ★ ★
小丹木木: 金幣+3, 鼓勵(lì)積極交流經(jīng)驗(yàn) 2012-10-24 15:13:47
小丹木木: 金幣+3, 鼓勵(lì)積極交流經(jīng)驗(yàn) 2012-10-24 15:13:47
| 是什么材料的總DNA？真菌的總量5-10ug即可，植物的20ug左右。圖中判斷似乎沒有22ug的總量，總DNA量不夠是原因之一。此外marker太多，加入5ng即可。建議下次加入用做探針的pcr產(chǎn)物做對照（多加一個(gè)孔），是監(jiān)控反應(yīng)體系的標(biāo)準(zhǔn)之一。如果marke和pcr產(chǎn)物對應(yīng)條帶都很清楚，而樣品沒有條帶，其可能原因有兩點(diǎn)：DNA量不夠，轉(zhuǎn)膜效率太低。 |
5樓2012-10-20 11:54:04
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2樓2012-10-16 22:54:15
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3樓2012-10-17 21:53:21
iriskye
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4樓2012-10-18 00:19:33
wandahuan
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6樓2012-10-28 20:39:35
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7樓2012-10-30 08:52:54
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8樓2012-10-30 09:02:32
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9樓2012-10-31 18:50:03
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10樓2012-10-31 18:52:55
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