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簡單HE認真木蟲 (小有名氣)
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蛋白切膠回收如何操作？
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| 我有一個蛋白，是GST融合標簽的，但始終在包涵體表達，不知該怎麼純化，想請教一下各位大俠？另外，問一下切膠回收行不？該怎麼作呢? |
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從表達的角度分析，融合了GST標簽的目的之一，就是促進可溶表達。 但若一直是以包涵體形式表達，則用途不大，而且走變、復(fù)性的路線也會由于受到GST標簽的影響而變 得不大合適。 若是這種情況建議可以考慮進行表達優(yōu)化，方法如下： 1. 表達條件優(yōu)化，培養(yǎng)基、溫度、誘導(dǎo)條件、抗生素用量等，可能是由于表達速度太快導(dǎo)致了不溶，可以通過溫度、誘導(dǎo)劑用量等來調(diào)節(jié)； 2. 宿主菌，嘗試一些其他的宿主菌，可能由于表達的目的蛋白對宿主有毒性等原因?qū)е铝瞬蝗堋?br /> 3. 載體，涉及到構(gòu)建問題，更換至SUMO、MBP等融合標簽，測試表達效果，另外若是目的蛋白一直以包涵體形式表達，可以考慮只融合His標簽或者不帶標簽而走變、復(fù)性路線； 若更換表達系統(tǒng)，涉及到整個構(gòu)建、表達體系，建議后續(xù)考慮。 |
5樓2012-10-19 09:28:56
3樓2012-10-18 19:32:54
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6樓2012-10-24 20:16:56
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