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有誰(shuí)做過(guò)鏈霉菌抗生素基因簇里面的調(diào)控基因的，怎么研究啊，新手不大懂~~~
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我這個(gè)調(diào)控基因是SARP調(diào)控基因，想根圍繞這個(gè)基因做點(diǎn)東西，但是自己不知道怎么入手，能做哪些方面的工作��？求高手指點(diǎn)。謝謝你們~~~~ |
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yandz680717
木蟲(chóng) (正式寫手)
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805085868(金幣+1): 謝謝參與
小丹木木: 金幣+3, 鼓勵(lì)交流 2012-10-22 13:35:30
805085868(金幣+1): 謝謝參與
小丹木木: 金幣+3, 鼓勵(lì)交流 2012-10-22 13:35:30
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首先生物信息學(xué)分析，主要涉及調(diào)控蛋白及對(duì)應(yīng)結(jié)合部位的DNA 代謝調(diào)控的啟動(dòng)子結(jié)構(gòu)分析 1)基因敲除, 突變子的篩選 2)調(diào)控蛋白的純化 3)EMSA(Electroforetic Mobility Shift Analyses)實(shí)驗(yàn)鑒定調(diào)控蛋白的結(jié)合區(qū):將純化后的調(diào)控蛋白用不同的濃度與預(yù)測(cè)啟動(dòng)子DNA進(jìn)行結(jié)合實(shí)驗(yàn), 觀察DNA的遷移率確定結(jié)合的區(qū)域。 4)對(duì)調(diào)控蛋白所調(diào)控的區(qū)域進(jìn)行點(diǎn)突變:設(shè)計(jì)含有不同的突變點(diǎn)的引物, 通過(guò)overlap-extension PCR 得到含有突變的調(diào)控蛋白編碼基因, 以及含有突變的啟動(dòng)子區(qū)域; 將突變后的蛋白克隆到表達(dá)載體上, 純化后分別與啟動(dòng)子作用, 鑒定調(diào)控蛋白以及啟動(dòng)子的保守區(qū)域. 5)啟動(dòng)子區(qū)域的克隆以及啟動(dòng)子活性的分析：PCR擴(kuò)增預(yù)測(cè)的啟動(dòng)子區(qū)域而得到不同區(qū)域的片段; 將其連接到含有報(bào)告基因lacZ 的無(wú)啟動(dòng)子載體上, 通過(guò)檢測(cè)b-半乳糖苷酶活性來(lái)檢測(cè)啟動(dòng)子的強(qiáng)弱。 6)確定轉(zhuǎn)錄起始位點(diǎn): 7)RT-PCR確定調(diào)控蛋白調(diào)控的操縱子轉(zhuǎn)錄是否是一個(gè)轉(zhuǎn)錄單位 |
2樓2012-10-21 09:09:50
3樓2012-10-21 23:06:07
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