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22.0kD-3.3kD小分子marker跑Tricine膠，7.8,5.8和3.3的條帶出不來，幫忙分析一下吧
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問題如帖子標(biāo)題所說，請大家?guī)兔鉀Q下~先謝過了 圖片大 只好附件了 請不要嫌麻煩，相互學(xué)習(xí)嘛~ 圖1 S是樣品；M是80、60、40、30、20、12kD的marker；m是solarbio的超低分子量蛋白marker，箭頭從上到下分別是22.0、14.4kD兩條帶，最后的三條7.8、5.8和3.3kD的就沒有出來，僅有第三個(gè)箭頭部分模糊的一片。m使用前按照說明書加熱處理。圖2 在跑的過程中照的，開跑沒多久m就開始擠占它兩邊loading buffer的泳道。圖3 是06年nature上的那張圖，我不要求那么清晰的，只要后邊三條帶全分開就好，起碼能發(fā)揮點(diǎn)兒marker應(yīng)有的作用。 1.膠濃度原因？這張用的12.5%tricine膠，16%Urea，20%urea的也跑過了，都是m下面的三個(gè)低分子的跑不出來。 2.上樣量不夠？曾經(jīng)考慮上樣量的問題，覺得8μL，10μL可能不夠，后來用了16μL，對于marker來說相當(dāng)大了，圖左邊的M也就用了4μL。（這個(gè)15T的蛋白marker建議分裝10μL） 3. 跑膠時(shí)間長，小肽出去了？溴酚藍(lán)留了3cm沒讓出去，后來為了排除這個(gè)原因，separating gel時(shí)間也是比往常少1-2h，跑膠過程中的溫度控制沒問題,可是情況未改變。 |
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2012-10-30 10:57:28, 1.05 M
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