 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 5 | 1/1 | 返回列表 |
| 查看: 1678 | 回復(fù): 12 | |||
| 當(dāng)前只顯示滿足指定條件的回帖，點(diǎn)擊這里查看本話題的所有回帖 | |||
淘氣維尼89木蟲 (小有名氣)
|
[求助]
RT-PCR求助
|
||
|
最近在做RT-PCR，使用的材料是實(shí)驗(yàn)室自己誘導(dǎo)培養(yǎng)的植物愈傷組織，提取RNA之后，逆轉(zhuǎn)錄合成cDNA，以此為模板進(jìn)行PCR。擴(kuò)增過500bp左右的基因，以及1500bp左右的基因，都沒有擴(kuò)出來?xiàng)l帶。將cDNA稀釋10倍后，500bp的基因片段擴(kuò)出來了，但是空白對(duì)照也有條帶。并且?guī)Э撞桓蓛�，感覺有東西沒跑出來似的。請(qǐng)大家?guī)蛶兔Ψ治鲆幌聠栴}出在哪，別的老師說問題可能有兩個(gè)方面：一是RNA質(zhì)量不好。二是選擇的細(xì)胞不好，有退化，所以大片段就擴(kuò)不出來 這是1500bp的基因，沒有目的條帶 這是500bp的基因，有目的條帶，最右邊是空白對(duì)照 |
回復(fù)此樓» 收錄本帖的淘帖專輯推薦
 資源 |
» 猜你喜歡
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之小鼠實(shí)驗(yàn)：嚴(yán)謹(jǐn)設(shè)計(jì)，解析生命機(jī)制的重要載體
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之重金屬檢測(cè)：精準(zhǔn)篩查，守護(hù)健康與環(huán)境的防線
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
化學(xué)工程及工業(yè)化學(xué)論文潤(rùn)色/翻譯怎么收費(fèi)?
已經(jīng)有89人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之“蛙測(cè)重金屬我背鍋三千”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之“鼠逃三次我發(fā)三篇SCI”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
納米粒度分析
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
林科院林化所招收材料與化工專業(yè)碩士，坐標(biāo)南京
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
留學(xué)--博士招生
已經(jīng)有16人回復(fù)
-
化學(xué)工程，本211，求調(diào)劑，ab區(qū)不限
已經(jīng)有4人回復(fù)
-
邵陽學(xué)院食品與化學(xué)工程學(xué)院碩士調(diào)劑
已經(jīng)有0人回復(fù)
» 本主題相關(guān)商家推薦: (我也要在這里推廣)
huangguoqing
木蟲 (正式寫手)
- 應(yīng)助: 31 (小學(xué)生)
- 金幣: 3524.6
- 散金: 100
- 紅花: 3
- 帖子: 356
- 在線: 305.1小時(shí)
- 蟲號(hào): 909932
- 注冊(cè): 2009-11-22
- 性別: GG
- 專業(yè): 基因組學(xué)
【答案】應(yīng)助回帖
★ ★ ★ ★ ★ ★
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
小丹木木: 金幣+3, 鼓勵(lì)應(yīng)助，熱心的蟲蟲 2012-10-31 15:20:50
淘氣維尼89: 金幣+3, ★★★很有幫助 2012-11-01 16:07:55
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
小丹木木: 金幣+3, 鼓勵(lì)應(yīng)助，熱心的蟲蟲 2012-10-31 15:20:50
淘氣維尼89: 金幣+3, ★★★很有幫助 2012-11-01 16:07:55
|
個(gè)人建議，僅供參考！ 1.不是十分同意樓上所說的污染說法，如果僅僅是污染條帶不會(huì)這么清晰； 2.建議你查一下你要的mRNA占總mRNA的比例，然后調(diào)整PCR時(shí)加cDNA的量； 3.500bp的雖然出現(xiàn)了條帶，但個(gè)人感覺不是你想要的東西，可以膠回收你要的那條帶，然后用膠回收產(chǎn)物做模板二次PCR或者克隆測(cè)序檢驗(yàn)一下； 4.選用適合擴(kuò)增長(zhǎng)片段的逆轉(zhuǎn)錄酶，或者在RT的時(shí)候更換隨機(jī)引物或者特異性引物進(jìn)行RT，且要注意RT溫度的變化； 5.點(diǎn)樣孔那里出現(xiàn)的白色條帶可能是PCR體系里的聚合酶等蛋白或buffer里面的一些鹽造成的。 |
9樓2012-10-31 09:41:15
2樓2012-10-30 19:10:59
caoxin1984
銅蟲 (小有名氣)
- 應(yīng)助: 2 (幼兒園)
- 金幣: 449.5
- 帖子: 129
- 在線: 22小時(shí)
- 蟲號(hào): 1972421
- 注冊(cè): 2012-09-04
- 性別: MM
- 專業(yè): 糖尿病
【答案】應(yīng)助回帖
★ ★ ★ ★
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
小丹木木: 金幣+2, 鼓勵(lì)應(yīng)助 2012-10-31 15:20:23
淘氣維尼89: 金幣+2, ★★★很有幫助 2012-11-01 16:07:24
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
小丹木木: 金幣+2, 鼓勵(lì)應(yīng)助 2012-10-31 15:20:23
淘氣維尼89: 金幣+2, ★★★很有幫助 2012-11-01 16:07:24
|
1500bp的沒有條帶，建議 1. 在NCBI驗(yàn)證一下引物是否正確，是否是你要P的目的基因 2. 選擇一個(gè)陽標(biāo)，即確定該基因表達(dá)的組織 500bp雖然P出來了，但是條帶很弱，建議 1. 加大每孔上樣量 2. 改變EB或GelRed等的濃度 空白條帶有顯示，一般是因?yàn)榧訕游廴緦?dǎo)致，建議每次加樣時(shí)更換槍頭，最好用帶濾芯的槍頭 祝好運(yùn)！ |
3樓2012-10-30 19:49:25
淘氣維尼89
木蟲 (小有名氣)
- 應(yīng)助: 9 (幼兒園)
- 金幣: 2193.1
- 帖子: 129
- 在線: 125.1小時(shí)
- 蟲號(hào): 1764336
- 注冊(cè): 2012-04-18
- 性別: GG
- 專業(yè): 抗體工程學(xué)
4樓2012-10-30 20:08:14
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 309求調(diào)劑 +7 | 誰不是少年 2026-03-29 | 7/350 |
|
|---|---|---|---|---|
|
|
[考研] 0856求調(diào)劑 +13 | zhn03 2026-03-25 | 14/700 |
|
|
|
[考研] 0703 化學(xué) 求調(diào)劑，一志愿山東大學(xué) 342 分 +4 | Shern—- 2026-03-28 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 求調(diào)劑 +7 | 爭(zhēng)取九點(diǎn)睡 2026-03-28 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 生物學(xué)學(xué)碩，一志愿湖南大學(xué)，初試成績(jī)338 +6 | YYYYYNNNNN 2026-03-26 | 7/350 |
|
|
[考研] 071000生物學(xué)求調(diào)劑，初試成績(jī)343 +7 | 小小甜面團(tuán) 2026-03-25 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 295材料工程專碩求調(diào)劑 +7 | 1428151015 2026-03-27 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 食品工程專碩一志愿中海洋309求調(diào)劑 +4 | 小張zxy張 2026-03-26 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 壓國(guó)家一區(qū)線，求導(dǎo)師收留，有恩必謝！ +7 | 迷人的哈哈 2026-03-28 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 085405 考的11408求各位老師帶走 +3 | Qiu學(xué)ing 2026-03-28 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 292求調(diào)劑 +14 | 鵝鵝鵝額額額額?/a> 2026-03-25 | 15/750 |
|
|
|
[考研] 311求調(diào)劑 +3 | 希望上岸阿小楊 2026-03-23 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 材料求調(diào)劑 +5 | .m.. 2026-03-25 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 343求調(diào)劑 +4 | 贈(zèng)我一本書 2026-03-23 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 327求調(diào)劑 +7 | prayer13 2026-03-23 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 材料考研求調(diào)劑 +3 | Dendel 2026-03-23 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 303求調(diào)劑 +6 | 藍(lán)山月 2026-03-25 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 334分 一志愿武理-080500 材料求調(diào)劑 +4 | 李李不服輸 2026-03-25 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 080500求調(diào)劑 +3 | zzzzfan 2026-03-24 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 344求調(diào)劑 +3 | desto 2026-03-24 | 3/150 |
|