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小木蟲論壇-學術(shù)科研互動平臺 » 生物醫(yī)藥區(qū) » 動植物 » 綜合其他 » 你們都測哪些指標
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你們都測哪些指標
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| 做有關(guān)植物的毒理實驗，大家一般都測哪些指標呢?感覺自己測的指標好少，我測抗氧化酶系（SOD/POD/CAT），MDA，還想測個超氧陰離子（O2-），大家覺著有沒有必要呢，是不是和前面哪個指標重復？另外大家給我推薦幾個植物常測的方法比較成熟的指標啊. |
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starseacow
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【答案】應(yīng)助回帖
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樓主確實沒讀懂文章中方法，不知是否通讀了全文，最好還是認真看看，PNAS那篇文章算是很經(jīng)典的，就算不能直接照搬方法，一些讀數(shù)據(jù)的分析和處理也值得學習。 就我感覺你的方法并不合適，對于植物材料，不能研磨碎了以后再加載探針檢測，葉綠體及其他植物細胞成分會影響你的結(jié)果。你如果沒有熒光顯微鏡之類的儀器，那還不如干脆就用傳統(tǒng)方法測H2O2，超氧和羥自由基，也可以反應(yīng)ROS產(chǎn)生。 說句題外話，樓主確實是做植物的新手啊，而且所在實驗室似乎也從來沒做過相關(guān)工作，很不明白為什么你的導師會給你這樣的項目。 |
12樓2012-11-07 22:34:37
starseacow
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2樓2012-11-05 17:02:35
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【答案】應(yīng)助回帖
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gyfgood: 金幣+20, 為專家的博學與熱心鼓掌！ 2012-11-08 23:29:33
gyfgood: 金幣+20, 為專家的博學與熱心鼓掌！ 2012-11-08 23:29:33
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上一個帖子可能講得太籠統(tǒng)。估計樓主是想研究某種物質(zhì)處理植物造成的一系列和ROS迸發(fā)相關(guān)的反應(yīng)。關(guān)于ROS工作，前一段時間我分享過一篇文章，你可以看看 http://www.gaoyang168.com/bbs/viewthread.php?tid=4835328 關(guān)于測哪些指標，重點在于你要解決什么問題，指標測的再多，說明不了任何問題，那就是浪費時間精力。現(xiàn)在可以說幾乎所有外界刺激與損傷，都會引起ROS迸發(fā)，抗氧化酶系活性變化，那么你單純測這些東西說實話沒意義，就算發(fā)文章也頂多是灌水的水平。舉個好文章的例子： Arabidopsis Nitric Oxide Synthase 1 Is Targeted to Mitochondria and Protects against Oxidative Damage and Dark-Induced Senescence Fang-Qing Guo and Nigel M. Crawford The Plant Cell December 2005 vol. 17 no. 12 3436-3450 這篇文章研究了線粒體NOS1對刺激的反應(yīng)，以及NOS1帶來的NO與ROS迸發(fā)的關(guān)系，并沒有羅列一大堆各種各樣抗氧化指標，而是為了證明自己的觀點，認真的選取公認可信的方法，做出漂亮可信的結(jié)果。這樣的工作解決問題，完整的講了一個故事，所以可以發(fā)到頂級雜志。咱們現(xiàn)在做的工作離plant cell可能很遙遠，但至少可以從想法和研究思路上向他們看齊。 我看過也解答過很多樓主的帖子，感覺你嘗嘗糾結(jié)于一些很細節(jié)的實驗問題，這很可能是由于你所在實驗組沒有支持你的條件，可以理解，深表同情，我也愿意盡可能幫你解決這些問題。但我感覺更重要的是你需要對自己的課題有更深入和全面的思考，在研究到底怎么做某些實驗之前，更重要的是明白你的課題涉及哪些內(nèi)容，目前的最新研究進展是什么，有哪些問題還沒有答案，自己如果要回答這些問題要怎么做等等。 |
3樓2012-11-05 18:41:06
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感謝你一直以來對我的幫助，我也發(fā)現(xiàn)了只要我發(fā)帖子一般都是等你來回答  ，感覺你挺厲害的。我的實驗做的也挺糾結(jié)的，各種不會各種不明白，大學知識全白學了現(xiàn)在一點用不上，等于從頭再來，老師給我定的課題又是我們實驗室的先例，我是帶頭做的對我期望很大，師哥師姐不做這方面也沒法幫我，更是難上加難，目前書上有的常規(guī)指標測的馬馬虎虎還算過關(guān)，老板就老是糾結(jié)于ROS和彗星實驗上，因為他覺著這是我們實驗室的特色。彗星太難了，小麥，單子葉植物，想取細胞核來做彗星，我就看過兩篇文獻，但一篇是培養(yǎng)的愈傷組織，還有一篇是直接養(yǎng)的小麥做的，而且作者是我以前的師哥，我現(xiàn)在天天聯(lián)系他問，最后他都怕了，把博士論文發(fā)給我說：我真不記得當時怎么做的了你自己好好看看我的論文吧，而且一直勸我換指示生物，但是這是我們老師的國家自然基金的課題定的沒法換。ROS我也了解了一些，最常用的就是DCFH-DA，而且我們實驗室做動物的也是用這個方法，儀器軟件啥的都準備好了，那個什么激光共聚焦顯微鏡我都沒見過。。。，所以我研究了下他們動物的方法原理，感覺就是取線粒體再加探針最好能測熒光強度。我按這方法來試驗了下，取植物線粒體再加探針測，試驗階段很成功，我以為行了，但是正式實驗就出問題了，有的處理組沒數(shù)據(jù)或很小，最近又試了好多次都不行，就是想不明白哪有問題，覺著是葉綠體影響了熒光強度，或者我沒取到線粒體，但是以前就是這么做的。。我又用根嘗試做，又有數(shù)據(jù)了，但是我前面指標全是用葉測的，這個用根測老板說不行。現(xiàn)在我就一直糾結(jié)于這兩個指標，所以就想到了用其他指標代替。你推薦給我的這篇文章我看過，我覺著測O2-和測SOD是重復的，測H2O2和測CAT時重復的，所以想測個總的ROS，這種想法對不對? 另外我剛看了一篇文獻測擬南芥ROS就是加探針測熒光強度，不知道你看過沒？The alternative oxidase lowers mitochondrial reactive oxygen production in plant cells. DENIS P. MAXWELL*, YONG WANG*, AND LEE MCINTOSH但是文獻太籠統(tǒng)了，我老是從文獻中學不到啥。 還有一點不明白的是，我看用DCFH-DA測ROS老提到什么六孔板什么的，感覺雖然都是用DCFH-DA法測的具體步驟也是不一樣的。我們都是直接提取線粒體，計算蛋白，根據(jù)蛋白量確定加的線粒體酶液量，最后再以每毫克蛋白的熒光強度表示結(jié)果來表明ROS的量。你要是感興趣的話我可以告訴你這個方法的具體，順便也幫我研究下這個方法，看我的思路是否可靠？我們師哥用這方法剛發(fā)了一篇文章，關(guān)于斑馬魚的，在Aquatic Toxicology上，題目是Effects of the ionic liquid [Omim]PF6 on antioxidant enzyme systems, ROS and DNA damage in zebrafish (Danio rerio)你有興趣可以看下。 |
4樓2012-11-05 19:50:02
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