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starseacow

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【答案】應(yīng)助回帖

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9樓: Originally posted by a71840584 at 2012-11-07 21:51:44
我就是這沒看懂啊,什么叫繼代培養(yǎng)后以指數(shù)形式生長3-4天的細胞?他是培養(yǎng)的愈傷組織?我是直接水培的小麥啊,在營養(yǎng)液里加有毒物質(zhì)染毒,我再怎么培養(yǎng)愈傷組織?...

這篇文章中用的就是煙草懸浮細胞,如何獲得該細胞你需要看看列出的參考文獻。讀文章需要多動動腦子,這篇文章中給出了使用探針測ROS的方法,你需要根據(jù)這個方法用在自己的實驗中,而不是讓你一步步照做。關(guān)于你的實驗問題,我的觀點還是你最好直接加載探針,用熒光顯微鏡拍照,這樣可以直接獲得關(guān)于葉片ROS產(chǎn)生的結(jié)果。
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11樓2012-11-07 22:29:37
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starseacow

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【答案】應(yīng)助回帖

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10樓: Originally posted by a71840584 at 2012-11-07 21:57:10
沒有對細胞破碎?意思是取完整的細胞?如何取?以每克鮮重表示也行啊,我可以取0.5g小麥葉片去測熒光強度,最后結(jié)果再乘以2就是了,問題是我這0.5g小麥葉片怎么用來測ROS?有了葉片怎么處理才能加探針?我以前都是 ...

樓主確實沒讀懂文章中方法,不知是否通讀了全文,最好還是認真看看,PNAS那篇文章算是很經(jīng)典的,就算不能直接照搬方法,一些讀數(shù)據(jù)的分析和處理也值得學(xué)習(xí)。
就我感覺你的方法并不合適,對于植物材料,不能研磨碎了以后再加載探針檢測,葉綠體及其他植物細胞成分會影響你的結(jié)果。你如果沒有熒光顯微鏡之類的儀器,那還不如干脆就用傳統(tǒng)方法測H2O2,超氧和羥自由基,也可以反應(yīng)ROS產(chǎn)生。

說句題外話,樓主確實是做植物的新手啊,而且所在實驗室似乎也從來沒做過相關(guān)工作,很不明白為什么你的導(dǎo)師會給你這樣的項目。
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12樓2012-11-07 22:34:37
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a71840584

金蟲 (正式寫手)

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12樓: Originally posted by starseacow at 2012-11-07 22:34:37
樓主確實沒讀懂文章中方法,不知是否通讀了全文,最好還是認真看看,PNAS那篇文章算是很經(jīng)典的,就算不能直接照搬方法,一些讀數(shù)據(jù)的分析和處理也值得學(xué)習(xí)。
就我感覺你的方法并不合適,對于植物材料,不能研磨碎 ...

何止是新啊太新了,老師就是想讓我開個頭做植物呢,我的專業(yè)是環(huán)境。。,這都哪跟哪啊,現(xiàn)在用的知識基本都是高中生物還沒忘的。我想問下你們做ROS不是取懸浮細胞嗎?懸浮細胞只有培養(yǎng)的愈傷組織才能提取到吧?都長好的葉片器官取細胞不大容易吧,真能取到細胞的話我另一個難題說不定都能解決了。我們這有倒置熒光顯微鏡能用在ROS上嗎?大哥還是教教我怎么用植物葉片取懸浮細胞吧。。。
再牛逼的肖邦也彈不出哥的憂傷。。。
13樓2012-11-08 00:02:53
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a71840584

金蟲 (正式寫手)

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11樓: Originally posted by starseacow at 2012-11-07 22:29:37
這篇文章中用的就是煙草懸浮細胞,如何獲得該細胞你需要看看列出的參考文獻。讀文章需要多動動腦子,這篇文章中給出了使用探針測ROS的方法,你需要根據(jù)這個方法用在自己的實驗中,而不是讓你一步步照做。關(guān)于你的實 ...

懸浮細胞?懸浮細胞一般都是和培養(yǎng)愈傷組織掛鉤吧,而起文獻還說指數(shù)生長的細胞更像是在培養(yǎng)愈傷組織了。另外取單細胞有機械法和酶解法,據(jù)我所知這兩種方法對單子葉植物都不怎么適合,大哥做ROS取啥細胞?
再牛逼的肖邦也彈不出哥的憂傷。。。
14樓2012-11-08 00:15:55
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starseacow

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【答案】應(yīng)助回帖

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14樓: Originally posted by a71840584 at 2012-11-08 00:15:55
懸浮細胞?懸浮細胞一般都是和培養(yǎng)愈傷組織掛鉤吧,而起文獻還說指數(shù)生長的細胞更像是在培養(yǎng)愈傷組織了。另外取單細胞有機械法和酶解法,據(jù)我所知這兩種方法對單子葉植物都不怎么適合,大哥做ROS取啥細胞?...

不同實驗根據(jù)目的需要選擇不同的實驗材料,有的是植物葉片,有點是發(fā)根或愈傷,還有的做懸浮細胞。文章是用懸浮細胞做材料研究ROS的,不代表你也需要把小麥葉片搞成懸浮細胞去做,那樣純粹多此一舉,而且很麻煩。ROS在葉片和懸浮細胞里都可以用探針測。
樓主需要的就是找一個合適的方法,那篇PNAS文章給出了用探針測的基本方法,你需要根據(jù)這個設(shè)計適合小麥葉片的。樓主去查查別人怎么用探針測葉片ROS迸發(fā)的文章吧。沒有熒光顯微鏡就用傳統(tǒng)方法測ROS吧。
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15樓2012-11-08 00:38:01
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a71840584

金蟲 (正式寫手)

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15樓: Originally posted by starseacow at 2012-11-08 00:38:01
不同實驗根據(jù)目的需要選擇不同的實驗材料,有的是植物葉片,有點是發(fā)根或愈傷,還有的做懸浮細胞。文章是用懸浮細胞做材料研究ROS的,不代表你也需要把小麥葉片搞成懸浮細胞去做,那樣純粹多此一舉,而且很麻煩。R ...

大哥我感覺我們的問題又回到原點了,雖然又對ROS的知識了解了一大圈,但是。。。我的問題,用葉片測ROS如何進行?我至今沒找到篇像樣的用葉片測ROS的文章,即使找到了我也不見得能理解吸收轉(zhuǎn)為己用。。,我也設(shè)計了直接測植物器官里ROS的方法啊,葉不行,根行,關(guān)鍵是我就要用葉,大哥說做ROS的就沒用葉什么的器官測過ROS嗎?
再牛逼的肖邦也彈不出哥的憂傷。。。
16樓2012-11-08 08:50:34
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a71840584

金蟲 (正式寫手)

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15樓: Originally posted by starseacow at 2012-11-08 00:38:01
不同實驗根據(jù)目的需要選擇不同的實驗材料,有的是植物葉片,有點是發(fā)根或愈傷,還有的做懸浮細胞。文章是用懸浮細胞做材料研究ROS的,不代表你也需要把小麥葉片搞成懸浮細胞去做,那樣純粹多此一舉,而且很麻煩。R ...

我以前看過一篇測其他植物葉子ROS的英文文獻,有幾個地方不太明白想向你請教下。
1.我看的那篇文獻說要加KCN和SHAM,干嘛的?有什么用?測ROS的都加嗎?你們也加嗎?我以前看的文獻都沒加的就這篇加。
2.文獻說要homogenized and thawed,意思是不是研磨。窟有Freeze thawing was repeated at least thrice是啥意思研磨3次?
3.加了探針后要孵育30min,怎么孵育?需要水浴嗎?我們現(xiàn)在都是37℃水浴20min。
4.離心中有9000x(上面寫的不是乘號是?怂)g離心,是不是意思就是9000g離心?
再牛逼的肖邦也彈不出哥的憂傷。。。
17樓2012-11-08 10:55:08
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16樓: Originally posted by a71840584 at 2012-11-08 08:50:34
大哥我感覺我們的問題又回到原點了,雖然又對ROS的知識了解了一大圈,但是。。。我的問題,用葉片測ROS如何進行?我至今沒找到篇像樣的用葉片測ROS的文章,即使找到了我也不見得能理解吸收轉(zhuǎn)為己用。。,我 ...

說句不太禮貌的話,我實在不知道你是怎么查的文章。用探針測量葉片ROS迸發(fā)的文章非常多,這已經(jīng)是很常見的試驗了,google學(xué)術(shù)上查查就有
Betacyanin synthesis in red beet (Beta vulgaris) leaves induced by wounding and bacterial infiltration is preceded by an oxidative burst
Physiological and Molecular Plant Pathology
Volume 64, Issue 3, March 2004, Pages 125–133

Analysis of reactive oxygen species in the guard cell of wheat stoma with confocal microscope
Microscopy Research and Technique
Volume 74, Issue 9, pages 795–798, September 2011
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18樓2012-11-08 17:13:14
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a71840584

金蟲 (正式寫手)

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18樓: Originally posted by starseacow at 2012-11-08 17:13:14
說句不太禮貌的話,我實在不知道你是怎么查的文章。用探針測量葉片ROS迸發(fā)的文章非常多,這已經(jīng)是很常見的試驗了,google學(xué)術(shù)上查查就有
Betacyanin synthesis in red beet (Beta vulgaris) leaves induced by wo ...

沒事我承認我水平確實有點次,不論是查英文文獻還說閱讀英文文獻,其實我來這就是想找個完整點的方案,就像測SOD、MDA那樣方法很固定的,包括試劑,植物組織前處理,測定。。。,不想懂太多,能做出來結(jié)果就行,反正將來也不干這行,現(xiàn)在老師交給我任務(wù)了我就想盡力完成,像仁兄你這樣懂這么多的現(xiàn)在確實不多都是比著葫蘆畫個瓢,學(xué)術(shù)不好搞啊不感興趣
再牛逼的肖邦也彈不出哥的憂傷。。。
19樓2012-11-08 23:44:09
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19樓: Originally posted by a71840584 at 2012-11-08 23:44:09
沒事我承認我水平確實有點次,不論是查英文文獻還說閱讀英文文獻,其實我來這就是想找個完整點的方案,就像測SOD、MDA那樣方法很固定的,包括試劑,植物組織前處理,測定。。。,不想懂太多,能做出來結(jié)果就 ...

看看我列的第一篇文章吧
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20樓2012-11-09 03:17:41
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