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[求助]
你們都測哪些指標(biāo)
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| 做有關(guān)植物的毒理實(shí)驗(yàn)，大家一般都測哪些指標(biāo)呢?感覺自己測的指標(biāo)好少，我測抗氧化酶系（SOD/POD/CAT），MDA，還想測個超氧陰離子（O2-），大家覺著有沒有必要呢，是不是和前面哪個指標(biāo)重復(fù)？另外大家給我推薦幾個植物常測的方法比較成熟的指標(biāo)啊. |
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我以前看過一篇測其他植物葉子ROS的英文文獻(xiàn)，有幾個地方不太明白想向你請教下。 1.我看的那篇文獻(xiàn)說要加KCN和SHAM，干嘛的？有什么用？測ROS的都加嗎？你們也加嗎？我以前看的文獻(xiàn)都沒加的就這篇加。 2.文獻(xiàn)說要homogenized and thawed，意思是不是研磨��？還有Freeze thawing was repeated at least thrice是啥意思研磨3次？ 3.加了探針后要孵育30min，怎么孵育？需要水浴嗎？我們現(xiàn)在都是37℃水浴20min。 4.離心中有9000x(上面寫的不是乘號是�？怂�)g離心，是不是意思就是9000g離心？ |
17樓2012-11-08 10:55:08
starseacow
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2樓2012-11-05 17:02:35
starseacow
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【答案】應(yīng)助回帖
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gyfgood: 金幣+20, 為專家的博學(xué)與熱心鼓掌！ 2012-11-08 23:29:33
gyfgood: 金幣+20, 為專家的博學(xué)與熱心鼓掌！ 2012-11-08 23:29:33
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上一個帖子可能講得太籠統(tǒng)。估計(jì)樓主是想研究某種物質(zhì)處理植物造成的一系列和ROS迸發(fā)相關(guān)的反應(yīng)。關(guān)于ROS工作，前一段時間我分享過一篇文章，你可以看看 http://www.gaoyang168.com/bbs/viewthread.php?tid=4835328 關(guān)于測哪些指標(biāo)，重點(diǎn)在于你要解決什么問題，指標(biāo)測的再多，說明不了任何問題，那就是浪費(fèi)時間精力�，F(xiàn)在可以說幾乎所有外界刺激與損傷，都會引起ROS迸發(fā)，抗氧化酶系活性變化，那么你單純測這些東西說實(shí)話沒意義，就算發(fā)文章也頂多是灌水的水平。舉個好文章的例子： Arabidopsis Nitric Oxide Synthase 1 Is Targeted to Mitochondria and Protects against Oxidative Damage and Dark-Induced Senescence Fang-Qing Guo and Nigel M. Crawford The Plant Cell December 2005 vol. 17 no. 12 3436-3450 這篇文章研究了線粒體NOS1對刺激的反應(yīng)，以及NOS1帶來的NO與ROS迸發(fā)的關(guān)系，并沒有羅列一大堆各種各樣抗氧化指標(biāo)，而是為了證明自己的觀點(diǎn)，認(rèn)真的選取公認(rèn)可信的方法，做出漂亮可信的結(jié)果。這樣的工作解決問題，完整的講了一個故事，所以可以發(fā)到頂級雜志。咱們現(xiàn)在做的工作離plant cell可能很遙遠(yuǎn)，但至少可以從想法和研究思路上向他們看齊。 我看過也解答過很多樓主的帖子，感覺你嘗嘗糾結(jié)于一些很細(xì)節(jié)的實(shí)驗(yàn)問題，這很可能是由于你所在實(shí)驗(yàn)組沒有支持你的條件，可以理解，深表同情，我也愿意盡可能幫你解決這些問題。但我感覺更重要的是你需要對自己的課題有更深入和全面的思考，在研究到底怎么做某些實(shí)驗(yàn)之前，更重要的是明白你的課題涉及哪些內(nèi)容，目前的最新研究進(jìn)展是什么，有哪些問題還沒有答案，自己如果要回答這些問題要怎么做等等。 |
3樓2012-11-05 18:41:06
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感謝你一直以來對我的幫助，我也發(fā)現(xiàn)了只要我發(fā)帖子一般都是等你來回答  ，感覺你挺厲害的。我的實(shí)驗(yàn)做的也挺糾結(jié)的，各種不會各種不明白，大學(xué)知識全白學(xué)了現(xiàn)在一點(diǎn)用不上，等于從頭再來，老師給我定的課題又是我們實(shí)驗(yàn)室的先例，我是帶頭做的對我期望很大，師哥師姐不做這方面也沒法幫我，更是難上加難，目前書上有的常規(guī)指標(biāo)測的馬馬虎虎還算過關(guān)，老板就老是糾結(jié)于ROS和彗星實(shí)驗(yàn)上，因?yàn)樗X著這是我們實(shí)驗(yàn)室的特色。彗星太難了，小麥，單子葉植物，想取細(xì)胞核來做彗星，我就看過兩篇文獻(xiàn)，但一篇是培養(yǎng)的愈傷組織，還有一篇是直接養(yǎng)的小麥做的，而且作者是我以前的師哥，我現(xiàn)在天天聯(lián)系他問，最后他都怕了，把博士論文發(fā)給我說：我真不記得當(dāng)時怎么做的了你自己好好看看我的論文吧，而且一直勸我換指示生物，但是這是我們老師的國家自然基金的課題定的沒法換。ROS我也了解了一些，最常用的就是DCFH-DA，而且我們實(shí)驗(yàn)室做動物的也是用這個方法，儀器軟件啥的都準(zhǔn)備好了，那個什么激光共聚焦顯微鏡我都沒見過。。。，所以我研究了下他們動物的方法原理，感覺就是取線粒體再加探針最好能測熒光強(qiáng)度。我按這方法來試驗(yàn)了下，取植物線粒體再加探針測，試驗(yàn)階段很成功，我以為行了，但是正式實(shí)驗(yàn)就出問題了，有的處理組沒數(shù)據(jù)或很小，最近又試了好多次都不行，就是想不明白哪有問題，覺著是葉綠體影響了熒光強(qiáng)度，或者我沒取到線粒體，但是以前就是這么做的。。我又用根嘗試做，又有數(shù)據(jù)了，但是我前面指標(biāo)全是用葉測的，這個用根測老板說不行。現(xiàn)在我就一直糾結(jié)于這兩個指標(biāo)，所以就想到了用其他指標(biāo)代替。你推薦給我的這篇文章我看過，我覺著測O2-和測SOD是重復(fù)的，測H2O2和測CAT時重復(fù)的，所以想測個總的ROS，這種想法對不對? 另外我剛看了一篇文獻(xiàn)測擬南芥ROS就是加探針測熒光強(qiáng)度，不知道你看過沒？The alternative oxidase lowers mitochondrial reactive oxygen production in plant cells. DENIS P. MAXWELL*, YONG WANG*, AND LEE MCINTOSH但是文獻(xiàn)太籠統(tǒng)了，我老是從文獻(xiàn)中學(xué)不到啥。 還有一點(diǎn)不明白的是，我看用DCFH-DA測ROS老提到什么六孔板什么的，感覺雖然都是用DCFH-DA法測的具體步驟也是不一樣的。我們都是直接提取線粒體，計(jì)算蛋白，根據(jù)蛋白量確定加的線粒體酶液量，最后再以每毫克蛋白的熒光強(qiáng)度表示結(jié)果來表明ROS的量。你要是感興趣的話我可以告訴你這個方法的具體，順便也幫我研究下這個方法，看我的思路是否可靠？我們師哥用這方法剛發(fā)了一篇文章，關(guān)于斑馬魚的，在Aquatic Toxicology上，題目是Effects of the ionic liquid [Omim]PF6 on antioxidant enzyme systems, ROS and DNA damage in zebrafish (Danio rerio)你有興趣可以看下。 |
4樓2012-11-05 19:50:02
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