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yaokuaile新蟲 (初入文壇)
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蛋白質(zhì)的Ni柱純化問題
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本人在做一個蛋白的Ni柱純化，第一次的蛋白表達(dá)N端His，過Ni柱，因為不掛柱，所以進(jìn)行了雙His表達(dá)，但是，再次過Ni柱時情況很詭異，不同的咪唑梯度都能洗脫下來N多條帶。用此Ni柱過其他蛋白時，也是可以洗脫掉N多條帶，因此，想請教各位，請各位大蝦幫幫忙啊，這種情況該怎么處理��？！謝過了啊 20121106 Ni柱結(jié)果.jpg |
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3樓2012-11-06 11:24:51
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【答案】應(yīng)助回帖
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我做過很多次鎳柱純化，不下30次。我覺得 1.你這個是新柱子嗎？新柱子結(jié)合力強(qiáng)，雜帶多。 2.你的buffer是按照說明書上配的嗎？GE預(yù)裝柱的buffer是ph7.4的PB，加0.5mol/l的Nacl，離子濃度高，減少非特異性結(jié)合。一切按照說明書來！ 3.也可能是你梯度設(shè)的太少，沒把雜蛋白洗下來。我一般都是50一個梯度，從50洗到500. 我用GE的預(yù)裝柱，梯度設(shè)多一些，洗出來的都很純，我純化過4個蛋白，都是加組氨酸標(biāo)簽鎳柱純化的 |
8樓2012-11-07 08:56:54
cicelyzh
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