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求助：為什么Ni柱再生后純化蛋白無活性~~~
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| 我做了兩次純化，第一次用的是一個(gè)舊柱子，上柱后用梯度洗脫液洗脫，檢測(cè)每個(gè)梯度洗下的酶都是有活性的。后來把柱子再生了一下，誘導(dǎo)表達(dá)后破碎菌體，將破碎上清檢測(cè)了一下也是有活性的，但是上柱純化透析復(fù)性之后就沒活性了，這樣看是柱子再生的問題嗎？ |
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 蛋白質(zhì)生物學(xué)實(shí)驗(yàn)經(jīng)驗(yàn) | 核酸生物學(xué)實(shí)驗(yàn)經(jīng)驗(yàn) |
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【答案】應(yīng)助回帖
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感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
myprayer: 金幣+1, 錯(cuò)別字不少哇菇?jīng)龉�。�?zèng)人玫瑰手有余香 2013-04-22 15:40:15
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應(yīng)該和再生沒什么關(guān)系,除非你操作不當(dāng). 不過透析復(fù)性是什么意思?難道你用的變性純化? 如果不是變形純化, 說明很可能你的酶在高鹽下,或者一定的pH時(shí)才有活性,因?yàn)槟闾岬降挠谢钚缘那闆r全是高鹽,或者purification buffer pH狀態(tài)下的,而透析后(一般偷襲是為了除鹽,且可能改變pH, 取決于你的dialysis buffer是什么),鹽濃度降低,或者pH變化等,活性就沒了.如果是這樣,你這算是個(gè)意外的大發(fā)現(xiàn) |
2樓2013-04-22 13:57:45
3樓2013-04-22 16:50:02
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renzhiq
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7樓2013-08-07 11:05:06
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8樓2013-08-07 11:08:27
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