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夢(mèng)不落張銅蟲 (小有名氣)
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[求助]
組織分布樣品制備方法
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最近在做五種成分在大鼠腎組織分布實(shí)驗(yàn)，樣品制備方法為：將大鼠腎稱重，加4倍10%氨水-生理鹽水，剪碎勻漿，取組織勻漿液400ul，加500ng/ml混標(biāo)和內(nèi)標(biāo)各50ul，加2倍量甲醇(1ml)，渦旋10min，離心（13000rpm，10min，4℃）后取上清液1ml，加10%氨水-生理鹽水1ml，加3ml乙酸乙酯，渦旋10分鐘后離心（3000rpm，10min，4℃），取上清液50℃氮?dú)獯蹈�，�?00ul10%乙腈復(fù)溶，13000rpm,4℃離心15min,取上清液進(jìn)樣。 問(wèn)題：樣品復(fù)溶離心后溶液上層有混懸液體，曾試過(guò)用0.22um濾膜過(guò)濾進(jìn)樣但過(guò)濾后兩種成分檢測(cè)不出。也試過(guò)只取中間澄清層進(jìn)樣，但柱子前端篩板堵了，求各位高手相助解決下樣品制備方法啊! |
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kkbyb
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4樓2012-11-07 14:39:48
wangyuanji
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2樓2012-11-06 22:04:49
夢(mèng)不落張
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3樓2012-11-07 08:54:37
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| 乙醚麻醉處死大鼠，經(jīng)左心室心臟灌注，至流出液幾乎無(wú)血色。取腦。剝除腦膜，稱重，按1:1（w/v）加入生理鹽水手動(dòng)勻漿，勻漿液置于5毫升EP管中，12000RPM/5MIN。取上清500微升，加有機(jī)溶劑萃取，渦旋，離心，取上層有機(jī)相，減壓揮干溶劑，少量甲醇復(fù)溶（濃集），渦旋，高速離心，進(jìn)樣測(cè)定。 |
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夢(mèng)不落張5樓2012-11-07 16:13:08
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