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eiieen新蟲 (小有名氣)
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[求助]
搖菌長不出來
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DH5α保種 第一次，從劃板的單菌落過夜搖菌，4.5ml的LB，一個單菌落。過夜，液體微渾濁，底部有沉淀。（一般正常的搖菌都是比較均勻的菌液，沒有沉淀） 第二次，直接從菌液接種搖菌的，20微升加到9ml的LB中，12小時來看，微渾濁，有沉淀。。 這是染菌了 還是接種量的問題，應(yīng)該是怎么的方式保種好 挑單菌落微量搖菌過夜，再擴(kuò)大培養(yǎng)過夜保種嗎？ |
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kx444555
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【答案】應(yīng)助回帖
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（1）直接拿保種的菌液做PCR，看質(zhì)粒是否還在 （2）如果還在，那么剩下的問題是， a: 有雜菌/噬菌體 （可以用空白Dh5a，不加抗生素過夜，看能否長出，如果和你描述一樣，那就是噬菌體） b: 培養(yǎng)基有問題 c: 抗生素有問題 d: 搖床/溫度有問題 e: 每一步樓蟲自己考慮吧，能做對照的做對照，逐步解決，good luck 就算是一個單克隆，扔到1L的LB里面，一夜足夠長到對數(shù)值。 |
6樓2012-11-21 13:01:44
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