zhangyonghu

首先，DNA里含蛋白是測(cè)的OD值發(fā)現(xiàn)的么？如果是用CTAB法的話有可能是酚沒(méi)除凈，但是如果做AFLP的話DNA的純度是可以適當(dāng)放低的，畢竟之后你要設(shè)計(jì)引物，PCR只按你的引物來(lái)擴(kuò)增，蛋白影響不大的；其次，不知道你做的是什么DNA，我做的水稻預(yù)擴(kuò)彌散一片，完全是沒(méi)有條帶的，但是做了選擴(kuò)以后，條帶就特別清晰很漂亮，我的老師告訴我在預(yù)擴(kuò)過(guò)程中沒(méi)有條帶都是正常的，正常操作來(lái)講是不需要跑膠的，建議你可以接著往下做選擴(kuò)試試。祝好運(yùn)～

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7樓2012-11-26 11:10:31

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zhangyonghu

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7樓: Originally posted by CXL19880406 at 2012-11-26 11:10:31
首先，DNA里含蛋白是測(cè)的OD值發(fā)現(xiàn)的么？如果是用CTAB法的話有可能是酚沒(méi)除凈，但是如果做AFLP的話DNA的純度是可以適當(dāng)放低的，畢竟之后你要設(shè)計(jì)引物，PCR只按你的引物來(lái)擴(kuò)增，蛋白影響不大的；其次，不知道你做的是 ...

謝謝，你的回帖。我現(xiàn)在是覺(jué)得我的彌散片段的分子量偏大，選擴(kuò)的時(shí)候不出帶，不知道是怎么回事啊

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8樓2012-11-26 14:27:45

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【答案】應(yīng)助回帖

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8樓: Originally posted by zhangyonghu at 2012-11-26 14:27:45
謝謝，你的回帖。我現(xiàn)在是覺(jué)得我的彌散片段的分子量偏大，選擴(kuò)的時(shí)候不出帶，不知道是怎么回事啊...

那需要檢測(cè)一下你設(shè)計(jì)的引物的特異性了吧，彌散分子里偏大說(shuō)明你PCR的時(shí)候片段大了，那應(yīng)該是引物的問(wèn)題了，根據(jù)酶切位點(diǎn)設(shè)計(jì)的接頭引物和另一個(gè)引物通過(guò)vector檢測(cè)一下特異性，另外PCR的退火溫度可以適當(dāng)調(diào)整一下。我做的時(shí)候也是一點(diǎn)點(diǎn)摸的條件來(lái)出結(jié)果的。祝你成功～

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9樓2012-11-26 14:41:09

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9樓: Originally posted by CXL19880406 at 2012-11-26 14:41:09
那需要檢測(cè)一下你設(shè)計(jì)的引物的特異性了吧，彌散分子里偏大說(shuō)明你PCR的時(shí)候片段大了，那應(yīng)該是引物的問(wèn)題了，根據(jù)酶切位點(diǎn)設(shè)計(jì)的接頭引物和另一個(gè)引物通過(guò)vector檢測(cè)一下特異性，另外PCR的退火溫度可以適當(dāng)調(diào)整一下 ...

謝謝，是退火溫度太低了么？

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10樓2012-12-03 18:26:39

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