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wlf200501
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[求助]
目的基因內(nèi)部含有與表達(dá)載體相同的酶切位點(diǎn)
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如圖，我要把我的目的片段連接到這個(gè)表達(dá)載體內(nèi)部，但是這個(gè)載體在構(gòu)建的時(shí)候目標(biāo)基因兩端只有NcolⅠ和HindⅢ這兩個(gè)酶切位點(diǎn)，可是我的目的基因內(nèi)有HindⅢ酶切位點(diǎn)，目前我的目的片段已經(jīng)連接到克隆載體上面了（只是簡(jiǎn)單連接到pEASY-T1 simple cloning kit，目的基因兩端還未加任何酶切位點(diǎn)）這就有個(gè)問(wèn)題了，用酶切從克隆載體上面切我的目的片段的時(shí)候會(huì)把我的基因也給切斷啊，這該怎么辦呢？大俠支支招啊。 表達(dá)載體圖.png |
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【答案】應(yīng)助回帖
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感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
小丹木木: 金幣+2, 鼓勵(lì)應(yīng)助 2012-11-28 13:53:13
wlf200501: 金幣+5, ★★★很有幫助, 謝謝幫助，目前我能想到的也是第二個(gè)方案了 2012-11-28 14:13:39
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有兩種方法可供選擇: 1.可以買一種In-fusion的試劑盒,目的片斷不需要酶切,直接進(jìn)行克隆，具體的操作方法可以看一下他們的說(shuō)明. 2.將載體上的 HindIII---phaT---KpnI這部分序列擴(kuò)增下來(lái)，加到你的目的序列上，然后用NcoI和KpnI進(jìn)行酶切克隆。 |
2樓2012-11-28 11:01:45
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