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看天

木蟲 (知名作家)

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[交流] 細(xì)菌總DNA提取條帶詭異

（1）我的是梭菌，G+
（2）omega試劑盒提取，帶玻璃粉的那種
（3）基因組大小4M，還有一個(gè)200kb的mega質(zhì)粒
160V跑15min見(jiàn)下圖：

野生菌 2012-11-30 15 小時(shí) 40 分鐘.jpg
我的問(wèn)題：
（1）我看別人提的總DNA都特別淡，為什么我的這么亮？
（2）聽(tīng)說(shuō)在總DNA提取過(guò)程中DNA會(huì)斷了成幾十KB的片段，在瓊脂糖上跑膠分不開(kāi)，也只有一條帶，可我的為什么兩條帶？
（3）如果有一條是質(zhì)粒，上面的是質(zhì)粒吧？，
（4）大家的總DNA提取圖中在下部都有彌散的RNA條帶，我的怎么這么干凈？
（5）點(diǎn)的兩個(gè)孔是同一個(gè)樣，為什么右邊那個(gè)還有好多在空里面不跑出來(lái)？

[ Last edited by 看天 on 2012-11-30 at 19:02 ]

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1樓 2012-11-30 19:00:36

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liudianlei

銀蟲 (小有名氣)

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小木蟲: 金幣+0.5, 給個(gè)紅包，謝謝回帖
看天: 金幣+4, 謝謝 2012-12-26 22:03:35

你的怎么沒(méi)看到marker條帶，你跑膠的時(shí)候電壓有點(diǎn)高了，一般100v就行，電壓過(guò)高，對(duì)膠有一定的影響，再重新跑個(gè)電泳，電壓100電流120,25分鐘，點(diǎn)5微升的樣試試。

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7樓2012-12-26 20:45:24

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cicelyzh

鐵桿木蟲 (職業(yè)作家)

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看天: 金幣+10, 謝謝 2012-12-01 14:29:43

1. 提總DNA也不一定很淡，看你上樣量是多少了。不知道你點(diǎn)了多少，感覺(jué)至少有10ug。
2. 兩條帶大概是因?yàn)槟愕木镉匈|(zhì)粒吧。提出的染色體DNA一般會(huì)shear成幾十K，質(zhì)粒的結(jié)構(gòu)相對(duì)來(lái)說(shuō)更穩(wěn)定，如果操作溫柔的話應(yīng)該是完整的。
3. 這個(gè)不是很確定，我個(gè)人也認(rèn)為上面的是質(zhì)粒。
4. 你用的盒子里面是否有消化RNA。還有，如果樣品在-20度放置很久后RNA自己就慢慢降解了。
5. 跑不下來(lái)是因?yàn)橛械鞍孜廴�，形成DNA蛋白復(fù)合物�？赡苁菢悠窙](méi)有溶解很均勻，大概你加右邊的樣的時(shí)候吸的蛋白多一些。

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2樓2012-12-01 08:50:50

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wenzonglu

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看天: 金幣+5, 多謝啊 2012-12-01 19:03:10

建議樓主加個(gè)DNA標(biāo)準(zhǔn)樣品看看那兩個(gè)條帶到底多大后再分析。

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4樓2012-12-01 15:46:28

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mengtaji

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小木蟲: 金幣+0.5, 給個(gè)紅包，謝謝回帖
看天: 金幣+5, 蛋白沒(méi)去干凈條帶就很粗嗎 2012-12-26 13:30:21

感覺(jué)是不是提取的時(shí)候蛋白質(zhì)沒(méi)有去除干凈啊，跑出來(lái)的條帶就會(huì)不成帶狀，

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5樓2012-12-26 12:46:59

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簡(jiǎn)單回復(fù)

su-b086樓

2012-12-26 17:50

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