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[交流] 自殺型質(zhì)粒如何發(fā)生兩次重組？

在做自殺質(zhì)粒重組的課題，但是久想都不得解該質(zhì)粒怎樣去與宿主菌的染色體發(fā)生兩次重組呢？第一次是一段同源臂與互補區(qū)重組，這時候質(zhì)粒是什么狀態(tài)？斷了？并且也連在染色體上？第二次重組又怎樣發(fā)生？這里涉及的等位基因交換是咋回事？

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1樓 2012-12-10 02:19:26

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mtz0305

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4樓: Originally posted by yyongl-168 at 2012-12-20 18:41:14
第一次重組有兩種情況：1）插入型，即單交換，整個質(zhì)粒全部整合進基因組；2）雙交換，即替換型，通過上下游同源臂將抗生素基金整合進基因組；對于第二種情況，基因組敲除其實已經(jīng)完成，對于第一種情況，由于毒性編碼 ...

你好，我最近想做自殺質(zhì)粒的實驗，我現(xiàn)在有些困惑向你請教一下：目前我還沒有自殺質(zhì)粒，需要構建，考慮的轉(zhuǎn)導方式有種：電轉(zhuǎn)和結(jié)合轉(zhuǎn)移。（1）若用電轉(zhuǎn)化的話是不是質(zhì)粒上就沒有必要有oriT了，直接找一個普通的大腸窄宿主質(zhì)粒，加上抗性和同源片段就可以了？其實我不太理解，質(zhì)粒進去以后會不會被宿主的酶切成碎片，還有就是進行同源重組的時候是什么力量讓質(zhì)粒變成線性的。（2）結(jié)合轉(zhuǎn)移，自殺質(zhì)粒的oriT是不是只有和輔助質(zhì)粒的oriT一樣才能實現(xiàn)轉(zhuǎn)移？用同一個群的其他轉(zhuǎn)移質(zhì)�？梢詥�？謝謝

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5樓2013-12-24 10:12:57

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zhaodahe

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小丹木木: 金幣+2, 鼓勵交流 2012-12-10 15:56:42

一般是兩個同源片段，第一次發(fā)生重組，質(zhì)粒整合到基因組上；第二次是另一個同源片段重組，質(zhì)粒又從基因組上掉下來。你也可以理解成質(zhì)粒和基因組都斷了，而他們倆首尾相連。

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2樓2012-12-10 07:57:42

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sdgxz

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小丹木木: 金幣+2, 鼓勵交流 2012-12-10 15:56:52

同意樓上。第一次同源重組是，質(zhì)粒整個插入到染色體上，第二次時，可以認為是，在篩選壓力存在的情況下，質(zhì)粒自身發(fā)生環(huán)化，因為第一次重組后的染色體上有兩對同源臂存在。如果不環(huán)化下編碼毒性蛋白的基因的話，如SacB, 重組子是不長的

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3樓2012-12-10 15:35:27

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yyongl-168

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第一次重組有兩種情況：1）插入型，即單交換，整個質(zhì)粒全部整合進基因組；2）雙交換，即替換型，通過上下游同源臂將抗生素基金整合進基因組；對于第二種情況，基因組敲除其實已經(jīng)完成，對于第一種情況，由于毒性編碼基因的存在，在相應選擇壓力下，如Sucrose，質(zhì)粒必須環(huán)化出毒性編碼基因才能存活，而該環(huán)化可能產(chǎn)生基因突變株。

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4樓2012-12-20 18:41:14

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