 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
小木蟲論壇-學術科研互動平臺 » 生物醫(yī)藥區(qū) » 分子生物 » 綜合其他 » IPTG誘導表達的問題
| 5 | 2/1 | 返回列表 |
| 查看: 11817 | 回復: 12 | ||
| 當前只顯示滿足指定條件的回帖，點擊這里查看本話題的所有回帖 | ||
applexixixi木蟲 (小有名氣)
|
[求助]
IPTG誘導表達的問題
|
|
|
各位朋友，有誰做過大腸桿菌的IPTG誘導表達？我有一些問題想咨詢一下。 1，是不是一定要把大腸培養(yǎng)到對數(shù)期再加IPTG誘導？具體OD值是多少有明確要求嗎？ 2，我的表達質粒是pUC18加了我的目的基因，不同質粒對IPTG誘導表達有什么影響嗎？我看文獻用pET系列的很多，這個區(qū)別大嗎？ 3，要表達不同的目的基因，誘導的具體條件是不是不同呢？都需要做哪些條件的優(yōu)化？比如菌的OD值，IPTG濃度，誘導時間都需要做嗎？ 哪位朋友有現(xiàn)成的實驗方案最好了，希望能分享一下。 |
回復此樓» 猜你喜歡
不合理蛙科研實驗中的趣事：實驗器材的 “烏龍”
已經有0人回復
-
不合理蛙科研實驗中的趣事：和實驗材料的 “斗智斗勇”
已經有0人回復
-
化學工程及工業(yè)化學論文潤色/翻譯怎么收費?
已經有265人回復
-
蛋白質檢測：精準分析，解鎖生物分子的密碼
已經有0人回復
-
不合理蛙科研實驗之小鼠實驗：嚴謹設計，解析生命機制的重要載體
已經有0人回復
-
不合理蛙科研實驗之重金屬檢測：精準篩查，守護健康與環(huán)境的防線
已經有0人回復
-
不合理蛙科研實驗之“蛙測重金屬我背鍋三千”
已經有0人回復
-
不合理蛙科研實驗之“鼠逃三次我發(fā)三篇SCI”
已經有0人回復
-
納米粒度分析
已經有3人回復
-
林科院林化所招收材料與化工專業(yè)碩士，坐標南京
已經有0人回復
小冀-
版主 (著名寫手)
- 應助: 713 (博后)
- 貴賓: 3.033
- 金幣: 11446.9
- 散金: 1055
- 紅花: 82
- 帖子: 2509
- 在線: 445.9小時
- 蟲號: 1521695
- 注冊: 2011-12-03
- 性別: GG
- 專業(yè): 生物信息學
- 管轄: 微生物
12樓2014-10-22 21:48:42
czdaeq
銅蟲 (著名寫手)
- 應助: 22 (小學生)
- 金幣: 2512.1
- 散金: 3990
- 紅花: 6
- 帖子: 1712
- 在線: 161.2小時
- 蟲號: 1672565
- 注冊: 2012-03-07
- 專業(yè): 微生物學
【答案】應助回帖
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感謝參與，應助指數(shù) +1
gyesang: 金幣+2, 鼓勵應助！ 2012-12-11 20:11:59
applexixixi: 金幣+10, ★有幫助 2012-12-18 11:14:52
感謝參與，應助指數(shù) +1
gyesang: 金幣+2, 鼓勵應助！ 2012-12-11 20:11:59
applexixixi: 金幣+10, ★有幫助 2012-12-18 11:14:52
|
首先，IPTG濃度誘導一般可以在對數(shù)初期（OD,得需要你測生長曲線再定了）進行，這個時候菌體活性不錯，扛得住；但是對于一些特殊要求的實驗，比如表達的基因對于底物的利用很關鍵，那么需要一接種就誘導，要不然漲不起來的（但是這類一般就采用組成型，不用誘導型了）。 IPTG濃度，嚴格來說每種質粒（比如PUC18在MCS區(qū)插基因）都只需要探索一次即可（有的載體有的基因型最適表達量是不同滴）； 至于條件的摸索，一般先按文獻試試，只有不如人意時，才摸索看看有沒有改進，一般不是一上來就做這么多滴！ |
2樓2012-12-11 10:09:15
【答案】應助回帖
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感謝參與，應助指數(shù) +1
gyesang: 金幣+2, 鼓勵應助！ 2012-12-11 20:12:57
applexixixi: 金幣+15, ★★★很有幫助, 謝謝你 2012-12-18 11:15:37
感謝參與，應助指數(shù) +1
gyesang: 金幣+2, 鼓勵應助！ 2012-12-11 20:12:57
applexixixi: 金幣+15, ★★★很有幫助, 謝謝你 2012-12-18 11:15:37
|
30個金幣啊，可真真是不少的財物，見錢心喜了。 根據(jù)我多年IPTG誘導表達，主要是搖瓶的誘導表達經驗(發(fā)酵罐我們不用IPTG了)來大致地闡述一下： (1)質粒復制，蛋白誘導表達都是一個耗能的過程，會消耗宿主菌的ATP，因此增加了宿主菌的代謝負荷，抑制了宿主菌本身的生長繁殖。 (2)IPTG誘導表達其實沒有嚴格OD600nm限定范圍，不過很多人喜歡在對數(shù)初期(OD600nm=0.3-0.6)進行誘導，因為這個時候菌活力最高，誘導表達增加的負荷完全承受的住，并且菌體這個時候不會產生大量的副代謝產物，因此有利于產物表達和菌體繁殖。 (3)個人喜歡在對數(shù)后期或者平穩(wěn)期(OD600nm=2-3)誘導表達。對數(shù)初期誘導表達菌量不高，IPTG濃度相對較高，增加的負荷較大，因此最終誘導完畢菌體量較低，大概2-3左右。對數(shù)后期誘導菌體量較高，IPTG濃度相對較低，減少了負荷，最終菌體量較高。最重要的是對數(shù)后期誘導有利于結構蛋白 折疊，形成正確的結構，原理可能是后期誘導菌體蛋白表達速率下降，菌體各種輔助蛋白折疊的產物較多，因而有利于獲得可溶性蛋白。 (4)最后一點，不管是那個時期誘導，必然能獲得你需要的蛋白。搖瓶體系中，大腸桿菌能完全承受IPTG誘導表達，無需多慮。 |
3樓2012-12-11 14:31:10
sxxuan
金蟲 (著名寫手)
- MolEPI: 4
- 應助: 107 (高中生)
- 金幣: 3442.4
- 散金: 104
- 紅花: 17
- 帖子: 1478
- 在線: 266.1小時
- 蟲號: 512865
- 注冊: 2008-02-27
- 性別: MM
- 專業(yè): 生物化學
4樓2012-12-11 15:13:58
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 288求調劑，一志愿華南理工大學071005 +4 | ioodiiij 2026-03-17 | 4/200 |
|
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 0703化學調劑 +4 | pupcoco 2026-03-17 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 【0703化學調劑】-一志愿華中師范大學-六級475 +6 | Becho359 2026-03-11 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 生物學071000 329分求調劑 +3 | 我愛生物生物愛?/a> 2026-03-17 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 085601材料工程專碩求調劑 +5 | 慕寒mio 2026-03-16 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 085601求調劑 +4 | Du.11 2026-03-16 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 332求調劑 +6 | Zz版 2026-03-13 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 085600材料與化工 +4 | 安全上岸！ 2026-03-16 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 275求調劑 +4 | 太陽花天天開心 2026-03-16 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 278求調劑 +3 | Yy7400 2026-03-13 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 277材料科學與工程080500求調劑 +3 | 自由煎餅果子 2026-03-16 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 求老師收留調劑 +4 | jiang姜66 2026-03-14 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 22408總分284求調劑 +3 | InAspic 2026-03-13 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 070305求調劑 +3 | mlpqaz03 2026-03-14 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 080500，材料學碩302分求調劑學校 +4 | 初識可樂 2026-03-14 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 297一志愿上交085600求調劑 +5 | 指尖八千里 2026-03-14 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 求材料調劑 +5 | 隔壁陳先生 2026-03-12 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 0856材料與化工301求調劑 +5 | 奕束光 2026-03-13 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 四川大學085601材料工程專碩 初試294求調劑 +4 | 祝我們好在冬天 2026-03-11 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 283求調劑，材料、化工皆可 +8 | 蘇打水7777 2026-03-11 | 10/500 |
|