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養(yǎng)活它新蟲(chóng) (初入文壇)
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[求助]
LAMP引物問(wèn)題
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| 各位大俠，你們好，我初入分子這一領(lǐng)域，想請(qǐng)大家教一下怎么樣設(shè)計(jì)引物，有大體流程即可。謝謝。（以金黃色葡萄球菌為例） |
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hylee103
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2樓2012-12-20 15:23:21
養(yǎng)活它
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3樓2012-12-20 16:10:28
hylee103
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4樓2012-12-20 16:23:33
q317476148
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【答案】應(yīng)助回帖
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搜索文獻(xiàn)上提及的引物用于實(shí)驗(yàn)的具體步驟： 1. 先搜索與本實(shí)驗(yàn)相似或相同文獻(xiàn)上提及的目標(biāo)基因引物序列（以小鼠Mefc為例）； 2. 在http://www.ncbi.nlm.nih.gov/nuccore網(wǎng)站上搜索“mousemefc”，出現(xiàn)多個(gè)搜索結(jié)果，選擇“MusmusculusmyocyteenhancerfactorC,mRNA(cDNAcloneMGC:IMAGE  ,”打開(kāi)后點(diǎn)擊“CDS”,出現(xiàn)編碼區(qū)域的堿基序列。3. 驗(yàn)證文獻(xiàn)引物的正確性：（在word上操作即可） ①“ctrl+F”的對(duì)話(huà)框中鍵入F引物，即GCGCAGGGAATGGATACGG，點(diǎn)擊確定在全文中搜索此序列，即可找到F引物對(duì)應(yīng)的CDS中的位置； ②“ctrl+F”的對(duì)話(huà)框中鍵入R引物配對(duì)堿基的’-’方向，即“GCAAGAATAGGGTGGACCGT”,點(diǎn)擊確定在全文中搜索此序列，即可找到R引物對(duì)應(yīng)的CDS中的位置。 另注：由于反轉(zhuǎn)錄中的模板是mRNA(單鏈),所以只需要在反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)液中加入R引物。 |
5樓2012-12-23 16:31:00
趙云開(kāi)心哦
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6樓2018-08-14 11:00:38
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