 |
 |
 |
| 24小時(shí)熱門版塊排行榜 |
- >論壇更新日志 (5965)
- >導(dǎo)師招生 (1220)
- >考研 (1065)
- >文獻(xiàn)求助 (489)
- >蟲(chóng)友互識(shí) (295)
- >考博 (204)
- >休閑灌水 (182)
- >基金申請(qǐng) (180)
- >碩博家園 (136)
- >招聘信息布告欄 (104)
- >博后之家 (90)
- >綠色求助(高懸賞) (51)
- >論文投稿 (45)
- >找工作 (40)
- >SciFinder/Reaxys (24)
- >外文書籍求助 (19)
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 8 | 1/1 | 返回列表 |
| 查看: 2094 | 回復(fù): 7 | |||
[求助]
引物設(shè)計(jì)區(qū)域選擇問(wèn)題
|
|
我設(shè)計(jì)兼并引物。多序列比對(duì)發(fā)現(xiàn)三個(gè)保守區(qū)。一個(gè)在中上游，一個(gè)在中游，一個(gè)在下游末。我準(zhǔn)備選中上游和下游末分別設(shè)計(jì)上下游引物。但老師說(shuō)選中游設(shè)計(jì)簡(jiǎn)并引物就可以了。有經(jīng)驗(yàn)的朋友能告訴我我該選哪個(gè)保守區(qū)設(shè)計(jì)引物嗎？設(shè)計(jì)多少對(duì)比較好？用來(lái)擴(kuò)增未知基因保守區(qū)。 [ Last edited by 1949stone on 2012-8-20 at 07:49 ] |
回復(fù)此樓» 收錄本帖的淘帖專輯推薦
 實(shí)驗(yàn)操作 |
» 猜你喜歡
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)中的趣事：實(shí)驗(yàn)器材的 “烏龍”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)中的趣事：和實(shí)驗(yàn)材料的 “斗智斗勇”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
化學(xué)工程及工業(yè)化學(xué)論文潤(rùn)色/翻譯怎么收費(fèi)?
已經(jīng)有105人回復(fù)
-
蛋白質(zhì)檢測(cè)：精準(zhǔn)分析，解鎖生物分子的密碼
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之小鼠實(shí)驗(yàn)：嚴(yán)謹(jǐn)設(shè)計(jì)，解析生命機(jī)制的重要載體
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之重金屬檢測(cè)：精準(zhǔn)篩查，守護(hù)健康與環(huán)境的防線
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之“蛙測(cè)重金屬我背鍋三千”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之“鼠逃三次我發(fā)三篇SCI”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
納米粒度分析
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
林科院林化所招收材料與化工專業(yè)碩士，坐標(biāo)南京
已經(jīng)有0人回復(fù)
» 本主題相關(guān)價(jià)值貼推薦，對(duì)您同樣有幫助:
- 引物設(shè)計(jì)的問(wèn)題
已經(jīng)有13人回復(fù)
- primer 5 設(shè)計(jì)引物的問(wèn)題
已經(jīng)有16人回復(fù)
- 利用Primer 5設(shè)計(jì)引物問(wèn)題
已經(jīng)有6人回復(fù)
- 引物設(shè)計(jì)的問(wèn)題
已經(jīng)有6人回復(fù)
- 關(guān)于設(shè)計(jì)ＧＦＰ的引物設(shè)計(jì)問(wèn)題。專家請(qǐng)入內(nèi)
已經(jīng)有3人回復(fù)
- 做蛋白體外表達(dá)時(shí)的引物設(shè)計(jì)問(wèn)題！
已經(jīng)有12人回復(fù)
- 請(qǐng)教引物設(shè)計(jì)的問(wèn)題
已經(jīng)有6人回復(fù)
- 【求助/交流】緊急求助~~ 關(guān)于簡(jiǎn)并引物設(shè)計(jì) codehop 和genefisher 在線
已經(jīng)有12人回復(fù)
- 【求助/交流】引物設(shè)計(jì)的 序列選擇問(wèn)題
已經(jīng)有9人回復(fù)
- 【求助/交流】引物設(shè)計(jì)的問(wèn)題，大俠們來(lái)幫幫忙~謝謝了
已經(jīng)有7人回復(fù)
- 【求助/交流】求助，引物設(shè)計(jì)中的問(wèn)題
已經(jīng)有5人回復(fù)
- 【求助/交流】引物設(shè)計(jì)問(wèn)題求助！
已經(jīng)有5人回復(fù)
- 克隆基因全長(zhǎng)引物設(shè)計(jì)問(wèn)題
已經(jīng)有32人回復(fù)
心強(qiáng)我強(qiáng)
銅蟲(chóng) (正式寫手)
- 應(yīng)助: 1 (幼兒園)
- 金幣: 297.9
- 散金: 152
- 紅花: 2
- 帖子: 604
- 在線: 294.7小時(shí)
- 蟲(chóng)號(hào): 1158792
- 注冊(cè): 2010-11-30
- 性別: MM
- 專業(yè): 微生物生理與生物化學(xué)
2樓2012-08-19 14:44:22
3樓2012-08-20 00:36:18
|
設(shè)計(jì)簡(jiǎn)并引物至少需要上下游各有一個(gè)保守區(qū)域，且兩個(gè)保守區(qū)域相距50～ 400個(gè)aa為宜，使得pcr產(chǎn)物在150~1200bp之間，最重要的是每一個(gè)保守區(qū)域至少有6個(gè)aa殘基，因?yàn)槊織l引物至少18bp左右。若比對(duì)結(jié)果保守性不是很強(qiáng)很可能找不到6個(gè)aa的保守區(qū)域，這時(shí)可以根據(jù)物種的親緣關(guān)系，選擇親緣相近的物種進(jìn)行二次比對(duì)，若保守性仍達(dá)不到要求，則需進(jìn)行三次比對(duì)。總之，究竟要選多少序列來(lái)比對(duì)，要根據(jù)前一次比對(duì)的結(jié)果反復(fù)調(diào)整。最終目的就是有兩個(gè)6個(gè)aa且兩者間距離合適的保守區(qū)域。 |
4樓2012-08-20 17:32:12
5樓2012-08-20 17:33:36
【答案】應(yīng)助回帖
★ ★
fengyunqb: 金幣+2, ★★★★★最佳答案, 哈哈，萬(wàn)分感謝。 2012-08-21 12:52:24
fengyunqb: 金幣+2, ★★★★★最佳答案, 哈哈，萬(wàn)分感謝。 2012-08-21 12:52:24
|
你僅僅知道氨基酸序列？或是其他物種的基因序列？ 你目前的情況，兼并引物已經(jīng)設(shè)計(jì)好，可以先試一下PCR，如果得到你的預(yù)期大小的片段，膠回收，連接T-vector，測(cè)序。 在做PCR擴(kuò)增時(shí)，注意變換條件，特別是復(fù)性（退火）溫度，開(kāi)始的時(shí)候先從溫度相對(duì)較低比如50-55度開(kāi)始，多變幾個(gè)溫度，然后根據(jù)條帶調(diào)整條件。 也可以用降落PCR，不用理會(huì)復(fù)性溫度。 所用的核酸，DNA或者RNA一定要純，最好用適量，一般1000-10000個(gè)拷貝比較合適。如果是RNA，最好用mRNA。 最后，祝你好運(yùn)！ |
6樓2012-08-20 23:08:09
|
求助，我是準(zhǔn)備設(shè)計(jì)簡(jiǎn)并引物擴(kuò)增一個(gè)魚類的未知基因的保守區(qū)。一些文獻(xiàn)上是提取腦部總RNA，然后反轉(zhuǎn)錄得到第一鏈CDNA,然后用這CDNA做模板擴(kuò)增保守區(qū)。但是我老師的想法是直接提取DNA，然后用DNA做模板來(lái)擴(kuò)增保守區(qū)。請(qǐng)問(wèn)，這樣可行否？各自的有缺點(diǎn)是什么？你有經(jīng)驗(yàn)嗎，有經(jīng)驗(yàn)的話指點(diǎn)下，謝謝，我發(fā)了個(gè)這個(gè)問(wèn)題的帖子。去幫我回答金幣給你啊。  |
7樓2012-08-24 16:16:07
8樓2012-09-01 17:29:19
相關(guān)版塊跳轉(zhuǎn)
我要訂閱樓主 fengyunqb 的主題更新
| 8 | 1/1 | 返回列表 |
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 0703化學(xué)求調(diào)劑 +3 | 奶油草莓. 2026-03-22 | 4/200 |
|
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 一志愿重慶大學(xué)085700資源與環(huán)境，總分308求調(diào)劑 +6 | 墨墨漠 2026-03-23 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 276求調(diào)劑 +3 | YNRYG 2026-03-21 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 材料與化工085600，總分304，本科有兩篇sci參與，求調(diào)劑 +4 | 幸運(yùn)的醬醬 2026-03-22 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 315分，誠(chéng)求調(diào)劑，材料與化工085600 +3 | 13756423260 2026-03-22 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 尋找調(diào)劑 +4 | 倔強(qiáng)芒? 2026-03-21 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 303求調(diào)劑 +5 | 安憶靈 2026-03-22 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 0856材料專碩353求調(diào)劑 +4 | NIFFFfff 2026-03-20 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 求調(diào)劑 +3 | 13341 2026-03-20 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 311求調(diào)劑 +3 | 勇敢的小吳 2026-03-20 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 材料 271求調(diào)劑 +5 | 展信悅_ 2026-03-21 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 296求調(diào)劑 +4 | www_q 2026-03-20 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 0805材料320求調(diào)劑 +3 | 深海物語(yǔ) 2026-03-20 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 初始318分求調(diào)劑（有工作經(jīng)驗(yàn)） +3 | 1911236844 2026-03-17 | 3/150 |
|
|
|
[考研]
 材料與化工 322求調(diào)劑
+4
|
然11 2026-03-19 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 329求調(diào)劑 +9 | 想上學(xué)吖吖 2026-03-19 | 9/450 |
|
|
|
[考研] 一志愿西南交通 專碩 材料355 本科雙非 求調(diào)劑 +5 | 西南交通專材355 2026-03-19 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 一志愿 南京航空航天大學(xué)大學(xué) ，080500材料科學(xué)與工程學(xué)碩 +5 | @taotao 2026-03-20 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 廣西大學(xué)家禽遺傳育種課題組2026年碩士招生（接收計(jì)算機(jī)專業(yè)調(diào)劑） +3 | 123阿標(biāo) 2026-03-17 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 材料，紡織，生物（0856、0710），化學(xué)招生啦 +3 | Eember. 2026-03-17 | 9/450 |
|