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[交流]
電泳中個(gè)條件與蛋白聚體的關(guān)系 已有4人參與
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我有個(gè)問(wèn)題搞不懂啊，電泳中各個(gè)條件與蛋白是否解聚的關(guān)系，有以下幾點(diǎn)： 1.樣品煮沸能使蛋白解聚么？就是由亞基組成的蛋白解開成為單體 2.SDS能使由亞基組成的蛋白解聚么？ 3.SDS-PAGE中，很多人用含有2ME,SDS和 沒(méi)有2ME,有SDS的樣品處理液，根據(jù)結(jié)果斷定蛋白的亞基組成，這樣對(duì)么？ 4.如果SDS能使蛋白解聚，那么是不是只有用Native-PAGE才能鑒定蛋白的真實(shí)分子量啊？ 小妹是新人，希望同仁們指點(diǎn)啊，先謝過(guò)了。 |
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非常感謝您的解答，如果我要判斷一個(gè)蛋白是否聚體，是不是可以用Native-PAGE,然后樣品處理液一個(gè)用沒(méi)有SDS和2ME的， 另外一個(gè)樣品條件用有SDS和2ME再加煮沸，您看這樣可以嗎？ 還有一個(gè)問(wèn)題就是Native-PAGE是不是靠的蛋白自身在緩沖體系中所帶的電荷，再加上本身空間結(jié)構(gòu)的因素在膠中涌動(dòng)？那Maker是不是就失去了參考價(jià)值，因?yàn)橛縿?dòng)條件不是單一的靠分子量了啊，還受到空間結(jié)構(gòu)的影響，我說(shuō)的對(duì)么？希望不吝賜教啊 |
5樓2012-12-26 12:26:26
cicelyzh
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小木蟲: 金幣+0.5, 給個(gè)紅包，謝謝回帖
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1. 煮沸樣品可以是蛋白質(zhì)變性。如果buffer中沒(méi)有象SDS之類的去垢劑不能使亞基之間的作用完全解開。 2. SDS可以破壞亞基之間的疏水作用和氫鍵，從而使多亞基復(fù)合體解聚。 3. 加入巰基乙醇的目的是把二硫鍵還原成-SH。有些蛋白質(zhì)會(huì)靠二硫鍵形成二聚體，或者有亞基之間二硫鍵，光靠SDS不能使其完全解開。 4. SDS-PAGE來(lái)判斷蛋白質(zhì)的分子量實(shí)際上的單體亞基的分子量。如果你需要確定多亞基組成的蛋白復(fù)合體的分子量，加入SDS會(huì)破壞亞基之間的作用，只有在native條件下做。 |
2樓2012-12-25 17:09:39
3樓2012-12-26 00:02:42
alicelchf
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4樓2012-12-26 11:18:45
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