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cdmmore銅蟲(chóng) (小有名氣)
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[求助]
pET31b雙酶切為何只有一條帶呀？？？
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| 各位大俠好，最近我用pET31b空質(zhì)粒做Nde1和Xho1雙酶切，兩酶之間大約有380 bp，但為何雙酶切后看不到380 bp的條帶呢？？?jī)煞N酶沒(méi)有問(wèn)題，已經(jīng)驗(yàn)證過(guò)單酶切都能切開(kāi)，雙酶切也能切開(kāi)，大小是對(duì)的，但就是沒(méi)有切下來(lái)的小片段，這是為何呀？？？ |
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imyting
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【答案】應(yīng)助回帖
★ ★
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
cdmmore: 金幣+2, ★★★很有幫助, 謝謝，學(xué)習(xí)了 2012-12-30 13:07:47
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| 其實(shí)應(yīng)該是你沒(méi)看見(jiàn)，條帶亮度都是和質(zhì)量成正比的，你切下來(lái)的380bp片度與你的質(zhì)粒摩爾量是一樣的，那么你能期待它有多亮�。ü烙�(jì)只有你質(zhì)粒亮度的十幾分之一）？我覺(jué)得仔細(xì)看還是有的，不過(guò)用成像系統(tǒng)估計(jì)是看不見(jiàn)的。做分子的眼睛都是練出來(lái)的，特別是一些先雙酶切再膠回收的，經(jīng)�？床磺澹� |
3樓2012-12-30 02:13:05
ccharlien
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2樓2012-12-29 22:44:34
cicelyzh
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4樓2012-12-30 02:21:54
snoopyzxx
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5樓2012-12-30 10:57:38
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【答案】應(yīng)助回帖
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cdmmore: 金幣+2, ★★★很有幫助, 謝謝，這個(gè)建議很好，非常感謝！ 2012-12-30 13:19:47
cdmmore: 金幣+2, ★★★很有幫助, 謝謝，這個(gè)建議很好，非常感謝！ 2012-12-30 13:19:47
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還有一種可能就是你的目的基因沒(méi)有連接進(jìn)載體，就是說(shuō)僅僅是空載體，所以即使是單酶切還是雙酶切，都能切開(kāi)。 目的片段與載體連接后，建議同時(shí)做空載體連接對(duì)照。如果空連對(duì)照長(zhǎng)得很少，說(shuō)明目的基因正確連接的可能性就大。 如果沒(méi)做空連對(duì)照，建議先做一下菌液PCR，能擴(kuò)出來(lái)目的基因的那個(gè)克隆，再提質(zhì)粒酶切鑒定、測(cè)序鑒定。 或者，你不想做PCR，你可以同時(shí)多挑取幾個(gè)克隆，提質(zhì)粒酶切鑒定。 總之，鑒定的方法很多。 |
6樓2012-12-30 11:12:23
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