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bluesun5198銀蟲(chóng) (小有名氣)
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[求助]
AFLP選擴(kuò)彌散，無(wú)很明顯主帶
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做基因組DNA, AFLP引物篩選，第一張圖是預(yù)擴(kuò)增瓊脂糖檢測(cè)結(jié)果，第一排是我的預(yù)擴(kuò)產(chǎn)物（下面是幫人帶的樣）60V 1h， 1%的膠，沒(méi)注意顯色劑Gelred和膠的比例，故跑的不是很好。（酶切連接產(chǎn)物沒(méi)有稀釋直接做的預(yù)擴(kuò)） 后面兩張都是同一塊選擴(kuò)的膠，一個(gè)是正常曝光，另一個(gè)是過(guò)曝光的，由于點(diǎn)樣孔漏了，故只有前兩排孔比較完整。3%的膠，70V 50分鐘撿的，感覺(jué)選擴(kuò)的引物沒(méi)有一個(gè)能用的，不想上聚丙酰胺凝膠了，想直接跑熒光了。（選擴(kuò)引物是師姐留下的，時(shí)間有點(diǎn)久，溶液-20大概放了1年了，不知道還能用不） 求高人指點(diǎn)，是我選擴(kuò)體系的問(wèn)題，還是引物的問(wèn)題，還是說(shuō)我的預(yù)擴(kuò)出問(wèn)題了�？梢灾苯由蠠晒獠�？關(guān)鍵熒光引物貴啊。求指點(diǎn)啊 dell 2012-12-27 13hr 55min52(2) LY6 L1 L2 L24 L25 H21 H20.jpg dell 2012-12-31 14hr 09min選擴(kuò)1.jpg dell 2012-12-31 14hr 13min過(guò)曝光.jpg [ Last edited by bluesun5198 on 2013-1-3 at 23:00 ] |
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感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
bluesun5198: 金幣+10, ★有幫助 2013-01-04 15:52:29
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bluesun5198: 金幣+10, ★有幫助 2013-01-04 15:52:29
| 建議還是跑聚丙烯酰胺凝膠電泳，我覺(jué)得引物沒(méi)問(wèn)題，就是帶沒(méi)跑開(kāi)。另外，上樣量，膠濃，電泳電壓，時(shí)間都需要你自己摸索優(yōu)化。 |
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bluesun51982樓2013-01-04 09:33:35
3樓2013-01-04 11:21:17
bluesun5198
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4樓2013-01-04 15:51:09
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bluesun5198
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bluesun5198
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8樓2013-01-05 18:52:50
對(duì)你有幫助就行，實(shí)驗(yàn)不理想原因?qū)嵲谔嗔耍硞�(gè)環(huán)節(jié)出問(wèn)題都會(huì)影響最終的結(jié)果，最好自然就是重做咯，祝你實(shí)驗(yàn)順利~ 9樓2013-01-07 09:58:26
zhangyonghu
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10樓2013-03-05 18:08:29
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