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bluesun5198銀蟲 (小有名氣)
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[求助]
AFLP選擴彌散，無很明顯主帶
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做基因組DNA, AFLP引物篩選，第一張圖是預(yù)擴增瓊脂糖檢測結(jié)果，第一排是我的預(yù)擴產(chǎn)物（下面是幫人帶的樣）60V 1h， 1%的膠，沒注意顯色劑Gelred和膠的比例，故跑的不是很好。（酶切連接產(chǎn)物沒有稀釋直接做的預(yù)擴） 后面兩張都是同一塊選擴的膠，一個是正常曝光，另一個是過曝光的，由于點樣孔漏了，故只有前兩排孔比較完整。3%的膠，70V 50分鐘撿的，感覺選擴的引物沒有一個能用的，不想上聚丙酰胺凝膠了，想直接跑熒光了。（選擴引物是師姐留下的，時間有點久，溶液-20大概放了1年了，不知道還能用不） 求高人指點，是我選擴體系的問題，還是引物的問題，還是說我的預(yù)擴出問題了。可以直接上熒光不？關(guān)鍵熒光引物貴啊。求指點啊 dell 2012-12-27 13hr 55min52(2) LY6 L1 L2 L24 L25 H21 H20.jpg dell 2012-12-31 14hr 09min選擴1.jpg dell 2012-12-31 14hr 13min過曝光.jpg [ Last edited by bluesun5198 on 2013-1-3 at 23:00 ] |
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已經(jīng)有5人回復(fù)
7樓2013-01-05 13:58:45
【答案】應(yīng)助回帖
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
bluesun5198: 金幣+10, ★有幫助 2013-01-04 15:52:29
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bluesun5198: 金幣+10, ★有幫助 2013-01-04 15:52:29
| 建議還是跑聚丙烯酰胺凝膠電泳，我覺得引物沒問題，就是帶沒跑開。另外，上樣量，膠濃，電泳電壓，時間都需要你自己摸索優(yōu)化。 |
» 本帖已獲得的紅花（最新10朵）
bluesun51982樓2013-01-04 09:33:35
3樓2013-01-04 11:21:17
bluesun5198
銀蟲 (小有名氣)
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4樓2013-01-04 15:51:09
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