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[求助] 求助水樣中總DNA 的提取！

目前，我用MoBio 強(qiáng)力土壤 DNA 提取試劑盒 PowerSoil™ DNA Isolation Kit 提取油田水樣中的微生物總DNA，首先是用0.22的微孔濾膜過(guò)濾，然后剪碎加入到試劑盒中，按步驟提取，為什么總是提不出來(lái)？實(shí)驗(yàn)室室溫10-14度，謝謝！

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1樓 2013-01-07 00:08:10

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建議：1看水樣中其他雜質(zhì)是否過(guò)多？是否需要初步沉淀除雜、去油污，去除提DNA的干擾？
2、樣品中微生物種群及數(shù)量初步估計(jì)，數(shù)量很多還是極其稀少？是真菌多還是細(xì)菌多？G+還是G-? 如果數(shù)量極少，需要濃縮富集，是濾膜過(guò)濾還是離心沉淀等？
3、提取出來(lái)的DNA有時(shí)很稀少，常規(guī)電泳看不到，可通過(guò)PCR放大看看，紫外光度計(jì)看看，到底有沒(méi)有？
祝順利！

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老頑蟲(chóng)是大醬油滴：知新，行知，業(yè)精于勤。。。木蟲(chóng)的閨蜜叫木馬。。

2樓2013-01-07 09:20:09

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oldflying

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水樣提取DNA相對(duì)來(lái)說(shuō)還是比較容易的，在2004年的Science上有一篇是做的海洋宏基因組的，對(duì)你應(yīng)該有用，你可以去查一下：《Environmental Genome Shotgun sequencing of The Sargasso Sea》

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一個(gè)人的努力和堅(jiān)持！

3樓2013-01-07 13:28:38

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kiruwa

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我以前用過(guò)和你類似方法,也提不出來(lái),建議你可以采用MO BIO 提取水樣的kit. 這個(gè)土壤kit似乎對(duì)水樣沒(méi)用.

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請(qǐng)注意,照片不是我本人!!!請(qǐng)不要把此人和我的長(zhǎng)相聯(lián)系到一起去.

4樓2013-01-07 14:02:59

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xj8442cn

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水樣和緩沖液比例是多少？一般加大起始水量，同時(shí)減少水量在緩沖液的比例。測(cè)出來(lái)的量如果很少的話建議用2100檢測(cè)

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5樓2013-01-07 15:35:42

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mizhoulong

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不會(huì)吧，我用國(guó)產(chǎn)天根的都沒(méi)問(wèn)題。當(dāng)然不是給天根做廣告。

估計(jì)就是水樣中微生物濃度太低了，如果少于比如10E3，估計(jì)難于提取吧？

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環(huán)境衛(wèi)生、微生物學(xué)、衛(wèi)生應(yīng)急

6樓2013-01-08 05:35:52

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2樓: Originally posted by cqlsf at 2013-01-07 09:20:09
建議：1看水樣中其他雜質(zhì)是否過(guò)多？是否需要初步沉淀除雜、去油污，去除提DNA的干擾？
2、樣品中微生物種群及數(shù)量初步估計(jì)，數(shù)量很多還是極其稀少？是真菌多還是細(xì)菌多？G+還是G-? 如果數(shù)量極少，需要濃縮富集 ...

是先用濾紙過(guò)濾，然后又用濾膜抽濾的，油污應(yīng)該能除去吧，還有什么好的方法除油污�。课⑸锏臄�(shù)量挺多的，能達(dá)到10E4。

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7樓2013-01-08 09:35:50

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4樓: Originally posted by kiruwa at 2013-01-07 14:02:59
我以前用過(guò)和你類似方法,也提不出來(lái),建議你可以采用MO BIO 提取水樣的kit. 這個(gè)土壤kit似乎對(duì)水樣沒(méi)用.

水樣的好貴啊

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8樓2013-01-08 09:37:12

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harben

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eagle_edu: 金幣+6, ★★★很有幫助, 1 2013-01-11 08:56:05

我也是做油田產(chǎn)出水的，經(jīng)常是提不到可見(jiàn)條帶，但是PCR能擴(kuò)增出來(lái)，問(wèn)題的關(guān)鍵還是在菌體收集上。

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9樓2013-01-09 08:33:45

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9樓: Originally posted by harben at 2013-01-09 08:33:45
我也是做油田產(chǎn)出水的，經(jīng)常是提不到可見(jiàn)條帶，但是PCR能擴(kuò)增出來(lái)，問(wèn)題的關(guān)鍵還是在菌體收集上。

你都是怎樣收集菌體啊

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10樓2013-01-11 08:55:52

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