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轉(zhuǎn)基因猴子木蟲 (正式寫手)
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[求助]
重組大腸桿菌 鎳柱純化
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各位蟲子 我最近遇到了一個頭疼的問題 我構(gòu)建了一株重組大腸桿菌，載體是pET8a，宿主是BL21(3) 用TB培養(yǎng)基發(fā)酵24小時后離心收菌，超聲波破碎離心后，通過鎳柱純化。 今天SDS-PAGE結(jié)果顯示在破碎后樣品和上樣后洗脫樣品中有蛋白條帶，而且很多。而在不同濃度的咪唑洗下來的溶液中沒有條帶。胞外酶液有很多條帶。 總而言之，重組大腸桿菌發(fā)酵后有部分分泌到胞外，有部分在胞內(nèi)。在胞內(nèi)的呢，掛不住鎳柱，蟲子們，這是為什么呢？ 緊急求助啊 |
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snoopyzxx
木蟲 (著名寫手)
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2樓2013-01-07 20:59:56
cicelyzh
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~你的表達(dá)產(chǎn)物帶有可結(jié)合到Ni2+上的氨基酸殘基嗎？ 4樓2013-01-09 11:27:54
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轉(zhuǎn)基因猴子
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6樓2013-01-10 08:59:44
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