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丸子龍

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[求助] PCR產(chǎn)物電泳調(diào)低啊異常

PCR后電泳條帶異常，請(qǐng)大家?guī)兔Ψ治鲆幌驴赡茉�，謝謝啦！
W$V}OQOZ({WZ61]N@C$4GG4.jpg(12.87KB)
http://kuai.xunlei.com/d/LnU4DYEHDi-tUAQA4c2?p=130497
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1樓 2013-01-09 16:46:05

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cicelyzh

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【答案】應(yīng)助回帖

感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1

上面那么亮是模板加多了吧，對(duì)模板定量了嗎？一般PCR的模板用量在電泳時(shí)看不到的。此外，目的片段多大，用的什么酶？退火時(shí)間可以延長(zhǎng)到30-45秒。

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2樓2013-01-10 07:23:55

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【答案】應(yīng)助回帖

有可能模板太多；有可能引物設(shè)計(jì)不合理；有可能核酸提取有問(wèn)題，雜質(zhì)太多，或是已經(jīng)降解

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3樓2013-01-15 15:20:42

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navy132

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【答案】應(yīng)助回帖

你使用什么做的模板？我以前也遇到過(guò)這種情況，有可能是PCR反應(yīng)的酶在反應(yīng)過(guò)程中變性，造成的。你的片段多大，可以試著縮短延伸時(shí)間或者調(diào)低你的變性溫度。98度，個(gè)人覺(jué)得太高了。

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4樓2013-02-15 21:17:21

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