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ym6104金蟲 (小有名氣)
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[求助]
長片段的連接轉(zhuǎn)化問題，望大俠們賜教！
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| 新手一枚，現(xiàn)在在擴兩個3000bp左右的基因，做TA克隆，PCR的條帶很亮，膠回收后跑瓊脂糖檢測條帶也挺亮，用的是TAKARA 的LA TAQ，之后用TAKARA的PMD-19連接過夜，再用全式金的T1感受態(tài)轉(zhuǎn)化，涂板之后也長菌了，但沒有之前擴短片段的時候多，做菌落PCR檢測卻什么條帶也沒有�，F(xiàn)在覺得是片段太長沒有連接上，所以想請教一下各位，有什么改進的辦法嗎？還是說得分段擴增，那分段的話在分的片段的太小和引物設(shè)計上有什么要求嗎？ |
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draco1987
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10樓2013-01-10 23:02:18
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