 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 查看: 3617 | 回復(fù): 14 | ||
wl554520877鐵蟲 (初入文壇)
|
[求助]
求高人指點qpcr問題，擴(kuò)增效率太高！
|
|
|
最近做熒光定量，問題重重，先是跑了個內(nèi)參試試，做個標(biāo)曲，結(jié)果出來了，擴(kuò)增效率很高，達(dá)到200%，不過溶解曲線卻是單一峰；還有就是ntc也有值，搞不明白，跑了個膠發(fā)現(xiàn)有條帶應(yīng)該是引物二聚體吧，我新手也不確定。上圖吧，求分析，求幫助！ 4.jpg 2.jpg |
回復(fù)此樓» 本帖附件資源列表
-
歡迎監(jiān)督和反饋：小木蟲僅提供交流平臺，不對該內(nèi)容負(fù)責(zé)。
本內(nèi)容由用戶自主發(fā)布，如果其內(nèi)容涉及到知識產(chǎn)權(quán)問題，其責(zé)任在于用戶本人，如對版權(quán)有異議，請聯(lián)系郵箱：xiaomuchong@tal.com - 附件 1 : 1.jpg
- 附件 2 : 2.jpg
- 附件 3 : 4.jpg
2013-01-14 21:04:51, 131.92 K
2013-01-14 21:04:53, 122.64 K
2013-01-14 21:04:53, 15.23 K
» 猜你喜歡
不合理蛙科研實驗之“蛙測重金屬我背鍋三千”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實驗之“鼠逃三次我發(fā)三篇SCI”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
化學(xué)工程及工業(yè)化學(xué)論文潤色/翻譯怎么收費(fèi)?
已經(jīng)有264人回復(fù)
-
納米粒度分析
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
林科院林化所招收材料與化工專業(yè)碩士，坐標(biāo)南京
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
留學(xué)--博士招生
已經(jīng)有16人回復(fù)
-
化學(xué)工程，本211，求調(diào)劑，ab區(qū)不限
已經(jīng)有4人回復(fù)
-
湖北師范大學(xué)招調(diào)劑啦
已經(jīng)有6人回復(fù)
-
邵陽學(xué)院食品與化學(xué)工程學(xué)院碩士調(diào)劑
已經(jīng)有0人回復(fù)
» 本主題相關(guān)價值貼推薦，對您同樣有幫助:
- QPCR模板RNA逆轉(zhuǎn)錄為CDNA后，CT值過大
已經(jīng)有7人回復(fù)
- 求解：實時熒光定量PCR奇峰
已經(jīng)有18人回復(fù)
- 著急！RT-PCR擴(kuò)增效率低，情況很詭異，求助高手幫忙指點
已經(jīng)有12人回復(fù)
hubinghello
金蟲 (小有名氣)
- 應(yīng)助: 3 (幼兒園)
- 金幣: 735.9
- 紅花: 2
- 帖子: 179
- 在線: 88.3小時
- 蟲號: 1506561
- 注冊: 2011-11-23
- 性別: MM
- 專業(yè): 林木遺傳育種學(xué)
，問題還沒解決。覺得是引物問題。 
3樓2013-01-14 22:23:03
cicelyzh
鐵桿木蟲 (職業(yè)作家)
- MolEPI: 10
- 應(yīng)助: 1662 (講師)
- 金幣: 8693.8
- 紅花: 72
- 帖子: 3516
- 在線: 456小時
- 蟲號: 1614001
- 注冊: 2012-02-13
- 專業(yè): 生物化學(xué)
【答案】應(yīng)助回帖
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
|
擴(kuò)增效率高一般是說明有非特異性擴(kuò)增或者有引物二聚體。 如果有引物二聚體，熔解曲線上會有比產(chǎn)物溫度低的峰出現(xiàn)。一般的正常產(chǎn)物熔解溫度高于80°C，引物二聚體的熔解溫度會比較低，一般是七十多度。雖然你說熔解曲線是單一的峰，但在我看來，在70-80°C之間有兩個不明顯的小峰，從左邊的圖也能看出有三處slop的變化。溫度低的小峰在負(fù)對照中明顯放大。只有高于84°C的那個是正常產(chǎn)物。這個圖已經(jīng)很明顯的表示擴(kuò)增不特異。從跑的膠的圖上看，似乎有引物二聚體和單體，也可能是非特異產(chǎn)物。你的PCR體系中引物的濃度用的是多少？是不是太高了。此外，你是否對引物做了溫度梯度確定最佳退火溫度。 你的負(fù)對照擴(kuò)增產(chǎn)物的熔解曲線明顯只有溫度低的峰，沒有目標(biāo)峰，如果已經(jīng)用了最佳退火溫度，這說明引物設(shè)計有問題。 |
» 本帖已獲得的紅花（最新10朵）
wl5545208775樓2013-01-15 08:59:51
wl554520877
鐵蟲 (初入文壇)
- 應(yīng)助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 51.3
- 帖子: 50
- 在線: 9.6小時
- 蟲號: 1844729
- 注冊: 2012-06-02
- 性別: GG
- 專業(yè): 果樹學(xué)
2樓2013-01-14 21:08:04
wl554520877
鐵蟲 (初入文壇)
- 應(yīng)助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 51.3
- 帖子: 50
- 在線: 9.6小時
- 蟲號: 1844729
- 注冊: 2012-06-02
- 性別: GG
- 專業(yè): 果樹學(xué)
4樓2013-01-15 08:38:18
hubinghello
金蟲 (小有名氣)
- 應(yīng)助: 3 (幼兒園)
- 金幣: 735.9
- 紅花: 2
- 帖子: 179
- 在線: 88.3小時
- 蟲號: 1506561
- 注冊: 2011-11-23
- 性別: MM
- 專業(yè): 林木遺傳育種學(xué)
6樓2013-01-15 10:44:51
hubinghello
金蟲 (小有名氣)
- 應(yīng)助: 3 (幼兒園)
- 金幣: 735.9
- 紅花: 2
- 帖子: 179
- 在線: 88.3小時
- 蟲號: 1506561
- 注冊: 2011-11-23
- 性別: MM
- 專業(yè): 林木遺傳育種學(xué)
7樓2013-01-15 10:51:07
wl554520877
鐵蟲 (初入文壇)
- 應(yīng)助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 51.3
- 帖子: 50
- 在線: 9.6小時
- 蟲號: 1844729
- 注冊: 2012-06-02
- 性別: GG
- 專業(yè): 果樹學(xué)
8樓2013-01-15 13:07:10
hubinghello
金蟲 (小有名氣)
- 應(yīng)助: 3 (幼兒園)
- 金幣: 735.9
- 紅花: 2
- 帖子: 179
- 在線: 88.3小時
- 蟲號: 1506561
- 注冊: 2011-11-23
- 性別: MM
- 專業(yè): 林木遺傳育種學(xué)
9樓2013-01-15 15:02:56
wl554520877
鐵蟲 (初入文壇)
- 應(yīng)助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 51.3
- 帖子: 50
- 在線: 9.6小時
- 蟲號: 1844729
- 注冊: 2012-06-02
- 性別: GG
- 專業(yè): 果樹學(xué)
10樓2013-01-15 16:36:29
相關(guān)版塊跳轉(zhuǎn)
我要訂閱樓主 wl554520877 的主題更新
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 理學(xué)07化學(xué) 303求調(diào)劑 +12 | 睿08 2026-03-27 | 12/600 |
|
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 275求調(diào)劑 +12 | waltzh 2026-04-01 | 12/600 |
|
|
|
[考研] 342求調(diào)劑 +12 | Mary Keen 2026-03-28 | 13/650 |
|
|
|
[考研] 070300化學(xué)求調(diào)劑 +13 | 小黃鴨寶 2026-03-30 | 13/650 |
|
|
|
[考研] 285求調(diào)劑 +7 | AZMK 2026-03-30 | 13/650 |
|
|
|
[考研]
 一志愿廈門大學(xué)化學(xué)學(xué)碩307求調(diào)劑
+11
|
y7czhao 2026-03-26 | 11/550 |
|
|
|
[考研] 324求調(diào)劑 +4 | 想上學(xué)求調(diào) 2026-04-01 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 材料專業(yè)求調(diào)劑 +7 | 月月鳥木 2026-04-01 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 生物學(xué)296求調(diào)劑 +10 | 湯圓包 2026-03-29 | 14/700 |
|
|
|
[考研] 318一志愿吉林大學(xué)生物與醫(yī)藥 求調(diào)劑 +6 | 篤行致遠(yuǎn). 2026-03-28 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 339求調(diào)劑 +5 | zjjkt 2026-03-31 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 0856 335分 +9 | cccchenso 2026-03-29 | 9/450 |
|
|
|
[考研] 085404 22408 315分 +5 | zhuangyan123 2026-03-31 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 262求調(diào)劑 +7 | ZZ..000 2026-03-30 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 298求調(diào)劑 +4 | 種圣賜 2026-03-28 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 305求調(diào)劑 +8 | RuiFairyrui 2026-03-28 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 數(shù)一英一271專碩（085401）求調(diào)劑，可跨 +7 | 前行必有光 2026-03-28 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 11408軟件工程求調(diào)劑 +3 | Qiu學(xué)ing 2026-03-28 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 304求調(diào)劑 +6 | 曼殊2266 2026-03-27 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 081200-11408-276學(xué)碩求調(diào)劑 +4 | 崔wj 2026-03-26 | 4/200 |
|