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C48/80刺激RBL-2H3細(xì)胞脫顆粒具體實驗方案 已有1人參與
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各位大俠，我最近在培養(yǎng)RBL-2H3細(xì)胞，以前實驗室里從來沒人做過這個細(xì)胞系，因此遇到了好多問題��！ 首先是細(xì)胞培養(yǎng)問題，我用的是GIBICO的MEM粉末培養(yǎng)基，加了15%的FBS，完全按照上海細(xì)胞庫上面的培養(yǎng)基配方來的，可是每次傳代后都有好些細(xì)胞會漂起來，而且有時候是成團(tuán)的漂起來，不知道這是什么原因啊？我種的也不多啊 其次，是我用C48/80刺激的問題。我的實驗方案如下： 細(xì)胞培養(yǎng)：取對數(shù)生長期細(xì)胞，調(diào)整濃度為2×105個/ml，以1ml/孔的量（2×105個/孔）接種于24孔板中，置37℃、5% CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)24 h后，各孔加入含不同濃度試藥的培養(yǎng)液0.5ml（這里，我用過完全培養(yǎng)基配藥，但酚紅的影響比較大；用過PBS，加藥組根本沒反應(yīng)，參考文獻(xiàn)上的用臺式液也沒有反應(yīng)，不知道是什么原因）。藥物配制溶液（DMSO）為空白對照，總酶孔加入1%TritonX-100溶液裂解細(xì)胞，每個濃度3個復(fù)孔，設(shè)置6個空白對孔(加入相應(yīng)的DMSO)，設(shè)置3個空白孔（無細(xì)胞），繼續(xù)培養(yǎng)。 樣本收集：細(xì)胞加藥培養(yǎng)1h后，冰浴10min終止反應(yīng)。將培養(yǎng)液全部吸取于1.5ml Ep管中，在4℃下3000轉(zhuǎn)離心10min，吸取上清，200ul分裝，儲存于-20℃，待進(jìn)行β-己糖胺酶檢測。 我想問一下這個藥物到底用什么稀釋比較好�。课铱吹轿墨I(xiàn)上用改良臺式液是可以做出來的啊，不知道為什么我卻做不出來，郁悶之極，還請各位高人指教�。。�！小女子在此感激不盡！ |
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已經(jīng)有3人回復(fù)
- RBL-2H3細(xì)胞能否進(jìn)行肝素合成研究？
已經(jīng)有6人回復(fù)
zhen真9
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6樓2013-04-03 16:40:32
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