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C48/80刺激RBL-2H3細(xì)胞脫顆粒具體實(shí)驗(yàn)方案 已有1人參與
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各位大俠，我最近在培養(yǎng)RBL-2H3細(xì)胞，以前實(shí)驗(yàn)室里從來沒人做過這個(gè)細(xì)胞系，因此遇到了好多問題��！ 首先是細(xì)胞培養(yǎng)問題，我用的是GIBICO的MEM粉末培養(yǎng)基，加了15%的FBS，完全按照上海細(xì)胞庫(kù)上面的培養(yǎng)基配方來的，可是每次傳代后都有好些細(xì)胞會(huì)漂起來，而且有時(shí)候是成團(tuán)的漂起來，不知道這是什么原因��？我種的也不多啊 其次，是我用C48/80刺激的問題。我的實(shí)驗(yàn)方案如下： 細(xì)胞培養(yǎng)：取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期細(xì)胞，調(diào)整濃度為2×105個(gè)/ml，以1ml/孔的量（2×105個(gè)/孔）接種于24孔板中，置37℃、5% CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)24 h后，各孔加入含不同濃度試藥的培養(yǎng)液0.5ml（這里，我用過完全培養(yǎng)基配藥，但酚紅的影響比較大；用過PBS，加藥組根本沒反應(yīng)，參考文獻(xiàn)上的用臺(tái)式液也沒有反應(yīng)，不知道是什么原因）。藥物配制溶液（DMSO）為空白對(duì)照，總酶孔加入1%TritonX-100溶液裂解細(xì)胞，每個(gè)濃度3個(gè)復(fù)孔，設(shè)置6個(gè)空白對(duì)孔(加入相應(yīng)的DMSO)，設(shè)置3個(gè)空白孔（無細(xì)胞），繼續(xù)培養(yǎng)。 樣本收集：細(xì)胞加藥培養(yǎng)1h后，冰浴10min終止反應(yīng)。將培養(yǎng)液全部吸取于1.5ml Ep管中，在4℃下3000轉(zhuǎn)離心10min，吸取上清，200ul分裝，儲(chǔ)存于-20℃，待進(jìn)行β-己糖胺酶檢測(cè)。 我想問一下這個(gè)藥物到底用什么稀釋比較好�。课铱吹轿墨I(xiàn)上用改良臺(tái)式液是可以做出來的啊，不知道為什么我卻做不出來，郁悶之極，還請(qǐng)各位高人指教�。。。⌒∨釉诖烁屑げ槐M！ |
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已經(jīng)有6人回復(fù)
2樓2013-01-19 12:09:08
3樓2013-01-21 15:37:15
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4樓2013-03-14 10:45:44
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2013-03-14 11:01:26, 522.1 K
5樓2013-03-14 10:47:26
luckybobozai
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