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liuliancy鐵桿木蟲 (正式寫手)
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[求助]
氨基酸DABS-Cl柱前衍生HPLC測定
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請教各位做氨基酸檢測用的是什么檢測方法?最近用DABS-Cl柱前衍生,總是衍生不好,用的美國藥典的方法,大致如下:樣品溶于50mM的碳酸氫鈉溶液,衍生試劑是1.3mg DABS-Cl溶于1ml乙腈,終止液是50mM ph 7.0 的磷酸鈉緩沖液與乙醇1:1混合,流動相為 A--25mM醋酸鈉(ph6.5)含DMF4%,B--乙腈。 衍生步驟:取20ul樣品溶液于離心管中,加40ul DABS-Cl,70℃水浴加熱10min,期間不斷搖勻,最后加60ul終止液。 液相條件:島津液相,波長 436nm,柱子 4.6×150mm,溫度40℃,流速1ml/min,0-20min 流動相A 85%,20-32 流動相A 60%,32-34流動相A 30%。 附件為美國藥典原文,不知道是理解錯誤還是哪里的問題,柱子可能不對,藥典用的250mm的柱子,請各位幫忙看看,謝了。。∵有一篇也照著做過,也沒做出來,希望大家給指導(dǎo)下........[ 來自科研家族 生物醫(yī)藥家族 ] |
鐵桿木蟲 (知名作家)
大圣

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