 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 5 | 2/1 | 返回列表 |
| 查看: 3386 | 回復(fù): 10 | |||
| 當前只顯示滿足指定條件的回帖，點擊這里查看本話題的所有回帖 | |||
gaoyu_1984金蟲 (小有名氣)
|
[求助]
rt-qpcr標準曲線問題
|
||
|
大家好，最近在做rt-qpcr，用了很久的標曲RNA樣品(最高濃度約為90ng/uL，稀釋5個梯度)，兩周之前一切正常，慢慢就開始最低那個濃度梯度不能擴增，后來迅速發(fā)展為倒數(shù)第二個也不能擴增。標曲只剩下了3個點。以為是RNA降解了，于是重新制作了標樣，濃度約為300ng/uL，可最低兩個濃度還是不能正確有效擴增，前面三個濃度CT分別約為（18.75，20.74, 24.54） 于是又考慮probe,primer，RNase free water污染等原因，重新取了primer和probe stock（開封半年，-30度保存），還是一樣。然后又用了新kit，全部使用了帶濾膜的槍頭，可還是一樣。 kit: platimum quantitative rt-pcr thermoscript one-step system (invitrogen) 還請明白人指點一下那里可能出了問題。 |
回復(fù)此樓» 猜你喜歡
蛋白質(zhì)檢測：精準分析，解鎖生物分子的密碼
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實驗之小鼠實驗：嚴謹設(shè)計，解析生命機制的重要載體
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
化學工程及工業(yè)化學論文潤色/翻譯怎么收費?
已經(jīng)有241人回復(fù)
-
不合理蛙科研實驗之重金屬檢測：精準篩查，守護健康與環(huán)境的防線
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實驗之“蛙測重金屬我背鍋三千”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實驗之“鼠逃三次我發(fā)三篇SCI”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
納米粒度分析
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
林科院林化所招收材料與化工專業(yè)碩士，坐標南京
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
留學--博士招生
已經(jīng)有15人回復(fù)
-
化學工程，本211，求調(diào)劑，ab區(qū)不限
已經(jīng)有4人回復(fù)
|
本帖內(nèi)容被屏蔽 |
11樓2013-01-31 08:47:35
wqj1988926
金蟲 (正式寫手)
- MolEPI: 1
- 應(yīng)助: 40 (小學生)
- 金幣: 1222
- 散金: 27
- 紅花: 5
- 帖子: 929
- 在線: 225.6小時
- 蟲號: 1156883
- 注冊: 2010-11-27
- 性別: GG
- 專業(yè): 生物大分子結(jié)構(gòu)與功能
【答案】應(yīng)助回帖
★ ★
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
amisking: 金幣+2, 鼓勵積極發(fā)帖幫助解答問題。 2013-01-28 19:58:10
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
amisking: 金幣+2, 鼓勵積極發(fā)帖幫助解答問題。 2013-01-28 19:58:10
|
我個人不太理解樓主的實驗，我說下我個人做這方面實驗的過程，希望有參考價值。 1. 采用絕對定量的方法的時候，做標曲所采用的是標準品質(zhì)粒，10倍濃度稀釋 2. 相對定量的時候做標曲所采用的標準品是反轉(zhuǎn)錄而成的cDNA，也是同樣稀釋。 樓主所采用的RNA來做標曲，理論上也是可以的，但操作不好的話可能真的會講解。 |
» 本帖已獲得的紅花（最新10朵）
gaoyu_1984
2樓2013-01-28 16:40:23
lidonghong
金蟲 (正式寫手)
- 應(yīng)助: 116 (高中生)
- 金幣: 2071.8
- 散金: 21
- 紅花: 2
- 帖子: 403
- 在線: 167.6小時
- 蟲號: 1098160
- 注冊: 2010-09-14
- 性別: GG
- 專業(yè): 生物大分子結(jié)構(gòu)與功能
【答案】應(yīng)助回帖
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
|
rna濃度越低越容易降解，這是一方面 另一方面認真回憶回憶你的實驗操作步驟，和第一次成功的那次比對下 |
» 本帖已獲得的紅花（最新10朵）
3樓2013-01-28 17:33:58
gaoyu_1984
金蟲 (小有名氣)
- 應(yīng)助: 2 (幼兒園)
- 金幣: 1339.3
- 帖子: 259
- 在線: 49小時
- 蟲號: 589040
- 注冊: 2008-08-29
- 專業(yè): 環(huán)境工程
4樓2013-01-29 08:22:48
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 331環(huán)境科學與工程求調(diào)劑 +3 | 熠然好運氣 2026-03-27 | 3/150 |
|
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 295求調(diào)劑 +5 | 1428151015 2026-03-27 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 291求調(diào)劑 +7 | 孅華 2026-03-22 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 320分，材料與化工專業(yè)，求調(diào)劑 +6 | 一定上岸aaa 2026-03-27 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 265求調(diào)劑11408 +3 | 劉小鹿lu 2026-03-27 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 求調(diào)劑 +4 | 零八# 2026-03-27 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 312求調(diào)劑 +9 | 上岸吧ZJY 2026-03-22 | 13/650 |
|
|
|
[考研] 341求調(diào)劑 +7 | 青檸檬1 2026-03-26 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 0703化學求調(diào)劑 +3 | 丹青奶蓋 2026-03-26 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 281求調(diào)劑 +3 | 亞克西good 2026-03-26 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 289求調(diào)劑 +17 | 碩星赴 2026-03-23 | 17/850 |
|
|
|
[考研] 一志愿天津大學339材料與化工求調(diào)劑 +3 | 江往賣魚 2026-03-26 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 求b區(qū)院校調(diào)劑 +4 | 周56 2026-03-24 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 材料調(diào)劑 +3 | iwinso 2026-03-23 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 086003食品工程求調(diào)劑 +6 | 淼淼111 2026-03-24 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 300分，材料，求調(diào)劑，英一數(shù)二 +5 | 超贊的 2026-03-24 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 341求調(diào)劑(一志愿湖南大學070300) +5 | 番茄頭--- 2026-03-22 | 6/300 |
|
|
|
[考研]
 一志愿東華大學化學070300，求調(diào)劑
+7
|
2117205181 2026-03-21 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 0703化學調(diào)劑 +4 | 妮妮ninicgb 2026-03-21 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 求調(diào)劑 +3 | .m.. 2026-03-21 | 4/200 |
|