 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 5 | 1/1 | 返回列表 |
| 查看: 3390 | 回復(fù): 10 | |||
| 當(dāng)前只顯示滿足指定條件的回帖，點(diǎn)擊這里查看本話題的所有回帖 | |||
gaoyu_1984金蟲 (小有名氣)
|
[求助]
rt-qpcr標(biāo)準(zhǔn)曲線問題
|
||
|
大家好，最近在做rt-qpcr，用了很久的標(biāo)曲RNA樣品(最高濃度約為90ng/uL，稀釋5個梯度)，兩周之前一切正常，慢慢就開始最低那個濃度梯度不能擴(kuò)增，后來迅速發(fā)展為倒數(shù)第二個也不能擴(kuò)增。標(biāo)曲只剩下了3個點(diǎn)。以為是RNA降解了，于是重新制作了標(biāo)樣，濃度約為300ng/uL，可最低兩個濃度還是不能正確有效擴(kuò)增，前面三個濃度CT分別約為（18.75，20.74, 24.54） 于是又考慮probe,primer，RNase free water污染等原因，重新取了primer和probe stock（開封半年，-30度保存），還是一樣。然后又用了新kit，全部使用了帶濾膜的槍頭，可還是一樣。 kit: platimum quantitative rt-pcr thermoscript one-step system (invitrogen) 還請明白人指點(diǎn)一下那里可能出了問題。 |
回復(fù)此樓» 收錄本帖的淘帖專輯推薦
 分子生化實(shí)驗(yàn)經(jīng)驗(yàn)積累 |
» 猜你喜歡
蛋白質(zhì)檢測：精準(zhǔn)分析，解鎖生物分子的密碼
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之小鼠實(shí)驗(yàn)：嚴(yán)謹(jǐn)設(shè)計，解析生命機(jī)制的重要載體
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
化學(xué)工程及工業(yè)化學(xué)論文潤色/翻譯怎么收費(fèi)?
已經(jīng)有143人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之重金屬檢測：精準(zhǔn)篩查，守護(hù)健康與環(huán)境的防線
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之“蛙測重金屬我背鍋三千”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之“鼠逃三次我發(fā)三篇SCI”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
納米粒度分析
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
林科院林化所招收材料與化工專業(yè)碩士，坐標(biāo)南京
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
留學(xué)--博士招生
已經(jīng)有16人回復(fù)
-
化學(xué)工程，本211，求調(diào)劑，ab區(qū)不限
已經(jīng)有4人回復(fù)
» 本主題相關(guān)價值貼推薦，對您同樣有幫助:
- RT-qPCR實(shí)驗(yàn)問題
已經(jīng)有23人回復(fù)
- 原子吸收 標(biāo)準(zhǔn)曲線問題
已經(jīng)有12人回復(fù)
- 大家做RT-qPCR設(shè)計引物用的什么軟件呀？
已經(jīng)有15人回復(fù)
- 著急！RT-PCR擴(kuò)增效率低，情況很詭異，求助高手幫忙指點(diǎn)
已經(jīng)有12人回復(fù)
- 蒽酮比色法標(biāo)準(zhǔn)曲線的問題
已經(jīng)有5人回復(fù)
- ICP-MS測鉛-標(biāo)準(zhǔn)曲線的問題？
已經(jīng)有13人回復(fù)
- 液相的標(biāo)準(zhǔn)曲線問題
已經(jīng)有6人回復(fù)
- IQ5 RT-QPCR問題求助
已經(jīng)有8人回復(fù)
- 一個關(guān)于qPCR標(biāo)準(zhǔn)曲線的問題。謝謝！
已經(jīng)有12人回復(fù)
- 熒光pcr標(biāo)準(zhǔn)曲線問題
已經(jīng)有21人回復(fù)
- CO2/CO標(biāo)準(zhǔn)曲線制作問題
已經(jīng)有6人回復(fù)
- p-NPP法測定脂肪酶活性p-NP標(biāo)準(zhǔn)曲線問題
已經(jīng)有9人回復(fù)
- 幫我看看這個溶解qPCR曲線
已經(jīng)有6人回復(fù)
- 請教ICP標(biāo)準(zhǔn)曲線的問題
已經(jīng)有4人回復(fù)
- 想問一下關(guān)于rt-qPCR的問題
已經(jīng)有4人回復(fù)
- 原子吸收 標(biāo)準(zhǔn)曲線問題。謝謝大家了。。
已經(jīng)有3人回復(fù)
- 【求助】請教：液相 標(biāo)準(zhǔn)曲線問題？
已經(jīng)有6人回復(fù)
- 【求助/交流】RNA的提取問題和qRT-PCR分析基因在不同時間的定量表達(dá)
已經(jīng)有10人回復(fù)
gaoyu_1984
金蟲 (小有名氣)
- 應(yīng)助: 2 (幼兒園)
- 金幣: 1339.3
- 帖子: 259
- 在線: 49小時
- 蟲號: 589040
- 注冊: 2008-08-29
- 專業(yè): 環(huán)境工程
送鮮花一朵 
6樓2013-01-29 08:30:24
wqj1988926
金蟲 (正式寫手)
- MolEPI: 1
- 應(yīng)助: 40 (小學(xué)生)
- 金幣: 1222
- 散金: 27
- 紅花: 5
- 帖子: 929
- 在線: 225.6小時
- 蟲號: 1156883
- 注冊: 2010-11-27
- 性別: GG
- 專業(yè): 生物大分子結(jié)構(gòu)與功能
【答案】應(yīng)助回帖
★ ★
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
amisking: 金幣+2, 鼓勵積極發(fā)帖幫助解答問題。 2013-01-28 19:58:10
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
amisking: 金幣+2, 鼓勵積極發(fā)帖幫助解答問題。 2013-01-28 19:58:10
|
我個人不太理解樓主的實(shí)驗(yàn)，我說下我個人做這方面實(shí)驗(yàn)的過程，希望有參考價值。 1. 采用絕對定量的方法的時候，做標(biāo)曲所采用的是標(biāo)準(zhǔn)品質(zhì)粒，10倍濃度稀釋 2. 相對定量的時候做標(biāo)曲所采用的標(biāo)準(zhǔn)品是反轉(zhuǎn)錄而成的cDNA，也是同樣稀釋。 樓主所采用的RNA來做標(biāo)曲，理論上也是可以的，但操作不好的話可能真的會講解。 |
» 本帖已獲得的紅花（最新10朵）
2樓2013-01-28 16:40:23
lidonghong
金蟲 (正式寫手)
- 應(yīng)助: 116 (高中生)
- 金幣: 2071.8
- 散金: 21
- 紅花: 2
- 帖子: 403
- 在線: 167.6小時
- 蟲號: 1098160
- 注冊: 2010-09-14
- 性別: GG
- 專業(yè): 生物大分子結(jié)構(gòu)與功能
【答案】應(yīng)助回帖
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
|
rna濃度越低越容易降解，這是一方面 另一方面認(rèn)真回憶回憶你的實(shí)驗(yàn)操作步驟，和第一次成功的那次比對下 |
» 本帖已獲得的紅花（最新10朵）
3樓2013-01-28 17:33:58
gaoyu_1984
金蟲 (小有名氣)
- 應(yīng)助: 2 (幼兒園)
- 金幣: 1339.3
- 帖子: 259
- 在線: 49小時
- 蟲號: 589040
- 注冊: 2008-08-29
- 專業(yè): 環(huán)境工程
4樓2013-01-29 08:22:48
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 壓國家一區(qū)線，求導(dǎo)師收留，有恩必謝！ +4 | 迷人的哈哈 2026-03-28 | 4/200 |
|
|---|---|---|---|---|
|
|
[考研]
 材料與化工考研調(diào)劑
+17
|
孅華 2026-03-22 | 17/850 |
|
|
[考研] 322求調(diào)劑 +6 | 宋明欣 2026-03-27 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 295求調(diào)劑 +5 | 1428151015 2026-03-27 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 085600材料與化工調(diào)劑 +10 | A-哆啦Z夢 2026-03-23 | 16/800 |
|
|
|
[考研] 298調(diào)劑 +3 | jiyingjie123 2026-03-27 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 求調(diào)劑 +3 | 劉柯@ 2026-03-24 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 材料學(xué)碩333求調(diào)劑 +8 | 北道巷 2026-03-24 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 340求調(diào)劑 +3 | Amber00 2026-03-26 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 材料考研求調(diào)劑 +3 | Dendel 2026-03-23 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 086000生物與醫(yī)藥292求調(diào)劑 +6 | 小小陳小小 2026-03-22 | 9/450 |
|
|
|
[考研] 0856求調(diào)劑 +8 | zhn03 2026-03-25 | 9/450 |
|
|
|
[考研] 309求調(diào)劑 +4 | gajsj 2026-03-25 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 調(diào)劑310 +3 | 溫柔的晚安 2026-03-25 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 299求調(diào)劑 +4 | 15188958825 2026-03-25 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 07化學(xué)303求調(diào)劑 +5 | 睿08 2026-03-25 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 一志愿南航 335分 | 0856材料化工 | GPA 4.07 | 有科研經(jīng)歷 +6 | cccchenso 2026-03-23 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 求b區(qū)院校調(diào)劑 +4 | 周56 2026-03-24 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 277分求調(diào)劑，跨調(diào)材料 +3 | 考研調(diào)劑lxh 2026-03-24 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 335求調(diào)劑 +4 | yuyu宇 2026-03-23 | 5/250 |
|