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[交流] 真菌提取DNA時(shí)是要求菌絲還是孢子？

我最近提取的幾個(gè)樣的DNA，剛提來(lái)時(shí)電泳液能檢測(cè)到，但是隔了一兩天做PCR怎么也做不出來(lái)？這是DNA死了嗎，這幾個(gè)樣，我是放的時(shí)間稍微長(zhǎng)一些~

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1樓 2013-01-30 15:20:34

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yuxiangrousi

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rainwander: 金幣+2, 鼓勵(lì)交流 2013-02-14 21:07:48

用菌絲就可以了在玻璃紙平皿上可以很方便的手機(jī)菌絲另外DNA不存在什么死不死的問(wèn)題可能是你反復(fù)凍融講解掉了也可能是引物的問(wèn)題不過(guò)按理說(shuō)只要DNA提的問(wèn)題不大都是很容易擴(kuò)出目標(biāo)條帶的（在反應(yīng)體系沒(méi)有問(wèn)題的情況下）

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11樓2013-02-01 21:43:26

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sofiali

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菌絲和孢子都可以，新鮮的菌絲要好些，我曾經(jīng)有一段時(shí)間，用菌絲能提出來(lái)，并且量很大，但是用菌絲和孢子的混合物提，DNA質(zhì)量就不好，不過(guò)PCR還是沒(méi)問(wèn)題的

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15樓2013-02-28 20:36:40

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棒哈哈

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我以前做用的是菌絲。DNA是不會(huì)那么快降解的。PCR 不出結(jié)果有多種原因，如果是 DNA 濃度過(guò)大，那就稀釋一下再用！祝好運(yùn)

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2樓2013-01-30 16:37:08

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yabing0324

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菌絲孢子都可以

P不出來(lái)原因太多了，看看體系配錯(cuò)沒(méi)，酶有沒(méi)有失活，引物常用的話放4度就好了，沒(méi)必要反復(fù)凍融

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4樓2013-01-30 21:56:21

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swaucq

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菌絲相對(duì)來(lái)說(shuō)要好提些，菌株生長(zhǎng)時(shí)間不要太長(zhǎng)。

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8樓2013-01-31 20:21:04

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2樓: Originally posted by 棒哈哈 at 2013-01-30 16:37:08
我以前做用的是菌絲。DNA是不會(huì)那么快降解的。PCR 不出結(jié)果有多種原因，如果是 DNA 濃度過(guò)大，那就稀釋一下再用！祝好運(yùn)

我就是納悶啊~我的以前三個(gè)樣保存的好好的，沒(méi)有什么問(wèn)題，就這批的樣這種結(jié)果，提DNA完了，我都是溶解在30ul的TE里，濃度大也改跑的出啊，不該連條帶都沒(méi)有啊

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3樓2013-01-30 16:57:16

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5樓2013-01-31 08:32:54

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同意樓上菌絲

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6樓2013-01-31 11:46:04

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dasheng5241

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孢子謝謝

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7樓2013-01-31 15:15:38

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都可以，都提過(guò)，看你是什么真菌了

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9樓2013-02-01 09:24:44

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hfwang111222

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rightodom

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12樓2013-02-03 02:37:45

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11樓: Originally posted by yuxiangrousi at 2013-02-01 21:43:26
用菌絲就可以了在玻璃紙平皿上可以很方便的手機(jī)菌絲另外DNA不存在什么死不死的問(wèn)題可能是你反復(fù)凍融講解掉了也可能是引物的問(wèn)題不過(guò)按理說(shuō)只要DNA提的問(wèn)題不大都是很容易擴(kuò)出目標(biāo)條帶的（在反應(yīng)體系沒(méi)有問(wèn)題 ...

一快的證對(duì)照沒(méi)有問(wèn)題，說(shuō)明體系和引物都沒(méi)有問(wèn)題，其他幾個(gè)樣我反復(fù)動(dòng)容了好幾次，這幾個(gè)就凍融了兩次，就成這樣了，我甚是不理解啊

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13樓2013-02-14 20:29:10

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13樓: Originally posted by zy1126 at 2013-02-14 20:29:10
一快的證對(duì)照沒(méi)有問(wèn)題，說(shuō)明體系和引物都沒(méi)有問(wèn)題，其他幾個(gè)樣我反復(fù)動(dòng)容了好幾次，這幾個(gè)就凍融了兩次，就成這樣了，我甚是不理解啊...

那估計(jì)是提的問(wèn)題可能鹽離子沒(méi)去干凈拉蛋白殘留拉各種原因你再提一次試試｀｀｀

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14樓2013-02-15 22:01:11

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