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legendkiller銀蟲 (小有名氣)
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[求助]
求助建立逆轉(zhuǎn)錄病毒載體顆粒生產(chǎn)細(xì)胞系的相關(guān)問題
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我最近看到一篇文章是“建立逆轉(zhuǎn)錄病毒載體顆粒生產(chǎn)細(xì)胞系”的文章，他是先用病毒轉(zhuǎn)化哺乳動物細(xì)胞，然后培養(yǎng)獲得病毒顆粒，再用此病毒顆粒去感染腫瘤細(xì)胞來獲得逆轉(zhuǎn)錄病毒載體顆粒生產(chǎn)細(xì)胞系。 我想問一下，既然哺乳動物細(xì)胞能生產(chǎn)該病毒顆粒，為什么還要去感染腫瘤細(xì)胞呢 或是為什么不直接感染腫瘤細(xì)胞呢 |
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legendkiller3樓2013-02-23 13:55:06
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【答案】應(yīng)助回帖
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作為外源基因?qū)氲氖侄�，假病毒顆粒侵染和普通的基因轉(zhuǎn)染有許多不同的特點。 一、假病毒侵染的導(dǎo)入效率要高于轉(zhuǎn)染。這一點在比較容易轉(zhuǎn)染的細(xì)胞上可能不明顯，但在比較難以轉(zhuǎn)染的細(xì)胞上，假病毒侵染就比轉(zhuǎn)染有優(yōu)勢的多，就lz帖中的疑問“為什么不直接感染腫瘤細(xì)胞呢？”，許多情況就是因為目的細(xì)胞系難以轉(zhuǎn)染，或是轉(zhuǎn)染率不高，不能滿足實驗的要求（比如基于shRNA的Knock down實驗，要求轉(zhuǎn)染率要大于50%，甚至70%），這時候用假病毒侵染就是解決問題的選擇之一（一般假病毒顆粒的生產(chǎn)細(xì)胞都是易于轉(zhuǎn)染的，比如HEK293）； 二、假病毒侵染導(dǎo)入的基因轉(zhuǎn)錄/表達(dá)的持續(xù)性要高于轉(zhuǎn)染。一般假病毒導(dǎo)入的基因，不易被宿主丟失，不僅在瞬時轉(zhuǎn)染的實驗中，基因轉(zhuǎn)錄/表達(dá)的持續(xù)時間長（比如Knockdown實驗中，假病毒侵染的Knockdown可以持續(xù)1week以上，而普通瞬時轉(zhuǎn)染的Knockdown效果，一般就2-4天，最多也不過10天），在穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的實驗中，病毒侵染的細(xì)胞獲得穩(wěn)定表達(dá)（插入基因組）的效率也要高出普通轉(zhuǎn)染很多。 三、假病毒侵染的靈活性要比普通轉(zhuǎn)染高。比如做體內(nèi)轉(zhuǎn)染，在比如做特異細(xì)胞導(dǎo)入（普通轉(zhuǎn)染是非特異的導(dǎo)入，而假病毒侵染，可以通過改變病毒的包膜蛋白顆粒，而改變其侵染的嗜性，從而做到特異導(dǎo)入）。 假病毒侵染的優(yōu)勢還很多，當(dāng)然并不是說病毒侵染就多么多么高級，這些都只是手段，根據(jù)不同的條件和目的供人選擇而已。希望能幫到lz。 |
2樓2013-02-23 12:48:43
legendkiller
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4樓2013-02-24 20:33:41
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